Encyclopedia of Experiments: Biology
É necessário ter uma assinatura JoVE para assistir este Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Gastrointestinal sistemi boşaltmak ve karın bölgesinde ek alan oluşturmak için enjeksiyondan önce yetişkin bir balığı 24 saat oruçlayın. İşlem gününde, balığı trikain ile uyuşturun ve ventral tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak bir sünger içinde bir yuvaya yerleştirin.
Daha sonra, istediğiniz miktarda enjeksiyon çözeltisini bir laboratuvar filmine pipetlayın ve bir insülin iğnesine çekin. İğneyi ön-arka gövde ekseninden 45 derecelik bir açıyla pelvik yüzgeçler arasında konumlandırın ve orta hatta hafifçe itin. İğneyi karın boşluğuna, karın duvarı ile iç organlar arasındaki boşluğa yaklaşık 1 ila 2 milimetre ilerletin ve ilgi çekici çözümü yavaşça enjekte edin. Herhangi bir dökülmeyi önlemek için iğneyi çekmeden önce beş saniye bekleyin. Şimdi, iğneyi dikkatlice çıkarın.
Enjeksiyondan sonra, balığı hızlı bir şekilde tatlı tank suyu içeren bir geri kazanım tankına aktarın. Balık hemen yüzmeye başlamazsa, anesteziden iyileşmesine yardımcı olmak için suyu solungaçların yakınında döndürün. Örnek protokolde, enfeksiyonu incelemek için RAG1 mutant balıklarına bir mikobakteriyum marinum çözeltisi enjekte edeceğiz.
- İlk olarak, seyreltilmiş bakteri çözeltisinin 5 mikroliter damlacığındaki boruyu bir parafin filmi parçasına koyun. Sonra, damlacığı 30 kalibrelik bir insülin iğnesine çekin.
Bu balık ventral tarafını nemli köpüklü bir plastik parçasının yarıklarına yerleştirin. İnsülin iğnesini pelvik yüzgeçler arasına 45 derecelik bir açıyla enjekte edin.
7H10 plakalarda her 15 dakikada bir kullanılan bakteriyel aliquot'tan örnekler alın. Enfeksiyon dozunu doğrulamak için bu örnekleri beş gün boyunca 29 santigrat derecede kuluçkaya bırakın.
