Encyclopedia of Experiments: Biology
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- गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट को खाली करने और पेट में अतिरिक्त जगह बनाने के लिए इंजेक्शन से पहले 24 घंटे के लिए एक वयस्क मछली को तेज करें। प्रक्रिया के दिन, मछली को ट्राइकेन के साथ एनेस्थेटाइज करें और इसे वेंट्रल साइड के साथ गीले स्पंज में एक स्लॉट में रखें।
इसके बाद, प्रयोगशाला फिल्म के एक टुकड़े पर इंजेक्शन समाधान की वांछित मात्रा को पिपेट करें और इसे इंसुलिन सुई में खींचें। पूर्वकाल-पीछे शरीर की धुरी से 45 डिग्री कोण पर पेल्विक पंखों के बीच सुई की स्थिति रखें और धीरे-धीरे इसे मिडलाइन पर पुश करें। सुई को पेट की गुहा में लगभग 1 से 2 मिलीमीटर आगे बढ़ाएं, पेट की दीवार और आंतरिक अंगों के बीच की जगह, और धीरे-धीरे ब्याज के समाधान को इंजेक्ट करें। किसी भी बिखराव से बचने के लिए सुई को बाहर निकालने से पहले पांच सेकंड तक प्रतीक्षा करें।
इंजेक्शन के बाद, मछली को जल्दी से एक रिकवरी टैंक में स्थानांतरित कर दें जिसमें ताजा टैंक का पानी होता है। यदि मछली तुरंत तैरना शुरू नहीं करती है, तो गिलों के पास पानी को भंवर से निकालें ताकि उसे संज्ञाहरण से उबरने में मदद मिल सके । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम संक्रमण का अध्ययन करने के लिए RAG1 उत्परिवर्ती मछली में एक माइकोबैक्टीरियम मारिनम समाधान इंजेक्ट करेंगे ।
- सबसे पहले, पैराफिन फिल्म के एक टुकड़े पर पतला जीवाणु समाधान की 5 माइक्रोलीटर बूंद से पाइप । फिर, एक 30 गेज इंसुलिन सुई में बूंद खींच । इस प्रयोग के लिए पांच से आठ महीने पुरानी मछली का उपयोग करें, एक जंगली प्रकार की मछली और दूसरे एक राग उत्परिवर्ती मछली जा रहा है ।
इन मछलियों के वेंट्रल साइड को नम फोम वाले प्लास्टिक के टुकड़े के स्लिट में रखें। 45 डिग्री कोण पर पेल्विक पंखों के बीच इंसुलिन सुई इंजेक्ट करें। इसके बाद सुई को ऊपर की ओर खोलते रहें ताकि पूरा खुलना पेट की गुहा के अंदर हो। - इसके बाद धीरे-धीरे बैक्टीरियल सॉल्यूशन इंजेक्ट करें। इसके बाद सावधानी से सुई निकालें और तुरंत मछली को ताजे टैंक के पानी से भरे रिकवरी टैंक में ट्रांसफर करें।
7H10 प्लेटों पर हर 15 मिनट में उपयोग में आने वाले बैक्टीरियल एलिकोट से नमूने लें। संक्रमण की खुराक को सत्यापित करने के लिए इन नमूनों को पांच दिनों तक 29 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। 3-अमीनोबेन्जो एसिड थाइल इल िस्टेर के 0.02% से अधिक पानी में इनक्यूबेटिंग करके किसी भी मछली को संक्रमण के लक्षणों के साथ इच्छामृत्यु सुनिश्चित करना।
