Encyclopedia of Experiments: Biology
É necessário ter uma assinatura JoVE para assistir este Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Snel een volwassen vis gedurende 24 uur voor injectie om het maagdarmkanaal te legen en extra ruimte in de buik te creëren. Verdoof de vis op de dag van de procedure met tricaïne en plaats deze in een sleuf in een natte spons met de ventrale kant naar boven gericht.
Pipetteer vervolgens de gewenste hoeveelheid injectieoplossing op een stuk laboratoriumfilm en trek deze in een insulinenaald. Plaats de naald tussen de bekkenvinnen onder een hoek van 45 graden van de voorste-achterste lichaamsas en duw deze voorzichtig in de middellijn. Schuif de naald ongeveer 1 tot 2 millimeter in de buikholte, de ruimte tussen de buikwand en interne organen, en injecteer langzaam de oplossing van belang. Wacht vijf seconden voordat u de naald eruit trekt om te voorkomen dat de naald wordt verwijderd.
Breng de vis na injectie snel over in een terugwinningstank met vers tankwater. Als de vis niet onmiddellijk begint te zwemmen, wervel dan het water in de buurt van de kieuwen om het te helpen herstellen van anesthesie. In het voorbeeldprotocol injecteren we een mycobacterium marinum-oplossing in RAG1-gemuteerde vissen om infectie te bestuderen.
- Pijp eerst uit 5 microliter druppel van de verdunde bacteriële oplossing op een stuk paraffinefilm. Trek vervolgens de druppel in een 30 gauge insulinenaald. Gebruik een vijf tot acht maanden oude vis voor dit experiment, waarbij de ene een wilde vis is en de andere een RAG-gemuteerde vis.
Plaats deze vis ventrale kant omhoog in de spleten van een stuk vochtig geschuimd plastic. Injecteer de insulinenaald tussen de bekkenvinnen onder een hoek van 45 graden. Houd de naaldopening naar boven om ervoor te zorgen dat de hele opening zich in de buikholte bevindt. Injecteer vervolgens langzaam de bacteriële oplossing. Verwijder hierna voorzichtig de naald en breng de vis onmiddellijk over naar een terugwinningstank gevuld met vers tankwater.
Neem monsters van de bacteriële aliquot die elke 15 minuten op 7H10-platen wordt gebruikt. Incubeer deze monsters gedurende vijf dagen op 29 graden Celsius om de infectiedosis te verifiëren. Controleer regelmatig het welzijn van de vis en zorg ervoor dat u vissen met infectiesymptomen euthanaseert door ze in water te incuberen met meer dan 0,02% van 3-aminobenzoëzuurethylester.
