Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Fasten Sie einen erwachsenen Fisch für 24 Stunden vor der Injektion, um den Magen-Darm-Trakt zu entleeren und zusätzlichen Platz im Bauch zu schaffen. Am Tag des Eingriffs, befeuchten Sie den Fisch mit Tricain und legen Sie ihn in einen Schlitz in einem nassen Schwamm mit der ventralen Seite nach oben.
Als nächstes pipette die gewünschte Menge an Injektionslösung auf ein Stück Laborfolie und ziehen Sie es in eine Insulinnadel. Positionieren Sie die Nadel zwischen den Beckenflossen in einem 45-Grad-Winkel von der vorderen hinteren Körperachse und drücken Sie sie vorsichtig an der Mittellinie ein. Schieben Sie die Nadel etwa 1 bis 2 Millimeter in die Bauchhöhle, den Raum zwischen der Bauchwand und den inneren Organen, und injizieren Sie langsam die Lösung von Interesse. Warten Sie fünf Sekunden, bevor Sie die Nadel herausziehen, um ein Verschütten zu vermeiden.
Nach der Injektion, übertragen Sie die Fische schnell in einen Erholungstank mit frischem Tankwasser. Wenn der Fisch nicht sofort zu schwimmen beginnt, wirbeln Sie das Wasser in der Nähe der Kiemen, um es von der Anästhesie zu erholen. Im Beispielprotokoll werden wir eine Mycobacterium marinum Lösung in RAG1 mutierten Fischen injizieren, um Infektionen zu untersuchen.
- Zuerst, Rohr aus 5 Mikroliter Tröpfchen der verdünnten bakteriellen Lösung auf ein Stück Paraffinfilm. Dann ziehen Sie das Tröpfchen in eine 30 Gauge Insulinnadel. Verwenden Sie einen fünf bis acht Monate alten Fisch für dieses Experiment, wobei einer ein Wildfisch und der andere ein RAG-mutierter Fisch ist.
Positionieren Sie diese Fisch-Ventralseite in den Schlitzen eines Stücks feuchten geschäumten Kunststoffs. Injizieren Sie die Insulinnadel zwischen den Beckenflossen in einem 45-Grad-Winkel. Halten Sie die Nadelöffnung nach oben, um sicherzustellen, dass sich die gesamte Öffnung in der Bauchhöhle befindet.
Nehmen Sie Proben aus dem bakteriellen Aliquot im Einsatz alle 15 Minuten auf 7H10 Platten. Inkubieren Sie diese Proben bei 29 Grad Celsius für fünf Tage, um die Infektionsdosis zu überprüfen. Überprüfen Sie das Wohlbefinden der Fische regelmäßig, um sicherzustellen, dass Alle Fische mit Infektionssymptomen einschläfert werden, indem Sie sie in Wasser mit mehr als 0,02% von 3-Aminobenzoesäure Ethylester inkubieren.
