Iniezione Intraperitoneale: Un metodo di consegna della soluzione nella cavità addominale di un pesce zebra adulto

- Digiunare un pesce adulto per 24 ore prima dell'iniezione per svuotare il tratto gastrointestinale e creare spazio aggiuntivo nell'addome. Il giorno della procedura, anestetizzare il pesce con tricaina e posizionare in una fessura in una spugna bagnata con il lato ventrale rivolto verso l'alto.

Successivamente, pipettare la quantità desiderata di soluzione di iniezione su un pezzo di pellicola di laboratorio e tirarla in un ago di insulina. Posizionare l'ago tra le pinne pelviche con un angolo di 45 gradi dall'asse anteriore-posteriore del corpo e spingerlo delicatamente verso la linea mediana. Far avanzare l'ago di circa 1-2 millimetri nella cavità addominale, nello spazio tra la parete addominale e gli organi interni e iniettare lentamente la soluzione di interesse. Attendere cinque secondi prima di estrarre l'ago per evitare qualsiasi fuoriuscita. Ora rimuovere con attenzione l'ago.

Dopo l'iniezione, trasferire rapidamente il pesce in un serbatoio di recupero contenente acqua fresca del serbatoio. Se il pesce non inizia a nuotare immediatamente, ruotare l'acqua vicino alle branchie per aiutarla a riprendersi dall'anestesia. Nel protocollo di esempio inietteremo una soluzione di mycobacterium marinum in pesci mutanti RAG1 per studiare l'infezione.

- In primo luogo, tubo da una goccia di 5 microliter della soluzione batterica diluita su un pezzo di pellicola di paraffina. Quindi, tirare la goccia in un ago di insulina calibro 30. Utilizzare un pesce di cinque o otto mesi per questo esperimento, con uno che è un pesce di tipo selvatico e l'altro è un pesce mutante RAG.

Posizionare il lato ventrale del pesce verso l'alto nelle fessure di un pezzo di plastica espansa umida. Iniettare l'ago di insulina tra le pinne pelviche con un angolo di 45 gradi. Tenere l'ago aperto verso l'alto per assicurarsi che l'intera apertura si trova all'interno della cavità addominale. Quindi, iniettare lentamente la soluzione batterica. Successivamente, rimuovere con cura l'ago e trasferire immediatamente il pesce in un serbatoio di recupero pieno di acqua dolce del serbatoio. Successivamente, rimuovere con cura l'ago e trasferire immediatamente il pesce in un serbatoio di recupero pieno di acqua dolce del serbatoio. Quindi, iniettare lentamente la soluzione batterica. Successivamente, rimuovere con cura l'ago e trasferire immediatamente il pesce in un serbatoio di recupero riempito con acqua dolce del serbatoio. Successivamente, rimuovere con cura l'ago e trasferire immediatamente il pesce in un serbatoio di recupero riempito con acqua dolce del serbatoio.

Prelevare campioni dall'aliquota batterica in uso ogni 15 minuti su piastre 7H10. Incubare questi campioni a 29 gradi Celsius per cinque giorni per verificare la dose di infezione. Controllare regolarmente il benessere del pesce, assicurandosi di eutanasiare qualsiasi pesce con sintomi di infezione incubandoli in acqua con oltre lo 0,02% di estere etilico acido 3-aminobenzoico.