Encyclopedia of Experiments: Biology
É necessário ter uma assinatura JoVE para assistir este Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- צום דג בוגר במשך 24 שעות לפני ההזרקה כדי לרוקן את מערכת העיכול וליצור מקום נוסף בבטן. ביום ההליך, להרדים את הדג עם tricaine ומניחים אותו לתוך חריץ בספוג רטוב עם הצד הגחוני פונה כלפי מעלה.
לאחר מכן, פיפטה את הכמות הרצויה של פתרון הזרקה על פיסת סרט מעבדה ולמשוך אותו לתוך מחט אינסולין. מקם את המחט בין סנפירי האגן בזווית של 45 מעלות מציר הגוף האחורי-אחורי והכנס אותה בעדינות בקו האמצע.
לאחר ההזרקה, מעבירים במהירות את הדג למיכל התאוששות המכיל מי מיכלים מתוקים. אם הדג לא מתחיל לשחות מיד, מערבבים את המים ליד הזימים כדי לעזור לו להתאושש מהרדמה. בפרוטוקול לדוגמה, נזריק תמיסת מרינום מיקובקטריום לדגים מוטנטים RAG1 כדי ללמוד זיהום.
- ראשית, צינור מתוך 5 טיפת microliter של הפתרון חיידקי מדולל על פיסת סרט פרפין.
מקם את הצד הגחוני של הדגים למעלה בחריצים של חתיכת פלסטיק מוקצף לח.
קח דגימות aliquot חיידקי בשימוש כל 15 דקות על 7H10 צלחות. הדגירה דגימות אלה ב 29 מעלות צלזיוס במשך חמישה ימים כדי לאמת את מינון הזיהום.
