Encyclopedia of Experiments: Biology
É necessário ter uma assinatura JoVE para assistir este Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Rask en voksen fisk i 24 timer før injeksjon for å tømme mage-tarmkanalen og skape ekstra plass i magen. På dagen for prosedyren bedøver du fisken med trikain og legger den i et spor i en våt svamp med ventralsiden vendt opp.
Deretter pipetterer du ønsket mengde injeksjonsoppløsning på et stykke laboratoriefilm og trekker den inn i en insulinnål. Plasser nålen mellom bekkenfinnene i en 45 graders vinkel fra den fremre bakre kroppsaksen og skyv den forsiktig inn i midtlinjen. Før nålen ca. 1 til 2 millimeter inn i bukhulen, mellomrommet mellom bukveggen og indre organer, og injiser sakte løsningen av interesse. Vent i fem sekunder før du trekker ut nålen for å unngå søl. Nå, fjern nålen forsiktig.
Etter injeksjon, overfør fisken raskt til en utvinningstank som inneholder ferskvannsvann. Hvis fisken ikke begynner å svømme umiddelbart, virvler vannet nær gjellene for å hjelpe det å gjenopprette fra anestesi. I eksempelprotokollen vil vi injisere en mykobakterier marinumløsning i RAG1 mutantfisk for å studere infeksjon.
- Først rør ut av 5 mikroliterdråpe av den fortynnede bakterieløsningen på et stykke parafinfilm. Trekk deretter dråpen inn i en 30 gauge insulinnål. Bruk en fem til åtte måneder gammel fisk til dette eksperimentet, der den ene er en villfisk og den andre er en RAG-mutantfisk.
Plasser disse fiskeventilsidene opp i spaltene på et stykke fuktig skumplast. Injiser insulinnålen mellom bekkenfinnene i en 45 graders vinkel. Hold nålen opp for å sikre at hele åpningen er inne i bukhulen. Deretter injiserer du sakte bakterieløsningen. Etter dette, fjern nålen forsiktig og overfør fisken umiddelbart til en gjenopprettingstank fylt med ferskvannsvann.
Ta prøver fra bakteriell aliquot i bruk hvert 15. minutt på 7H10-plater. Inkuber disse prøvene ved 29 grader Celsius i fem dager for å verifisere infeksjonsdosen. Kontroller fiskens velvære regelmessig, og sørg for å avlive fisk med infeksjonssymptomer ved å inkubere dem i vann med mer enn 0,02% av 3-aminobenzoic acid etyl ester.
