Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
ابدأ بوضع قطعة من شمع العظام في لوحتين لثقافة الخلايا وصفت بأنها اختبار والتحكم. ماصة كمية مناسبة من الإضاءة الحيوية التعبير عن خلايا سرطان الثدي في كل مركز لوحة واحتضان لوحات لمدة محددة للمساعدة في مرفق الخلية. وضع explant العظام الصغيرة على الشمع العظام في لوحة الاختبار وتأمينه عن طريق الضغط.
صب ببطء وسيلة ثقافة الخلية مع مصل البقر الجنين، ملحق النمو، إلى كل جانب لوحة لغمر explant واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة محددة. الأنسجة العظمية في لوحة الاختبار تطلق عوامل قابلة للذوبان، مثل السيتوكينات وكيناز SRC، والتي تجذب خلايا سرطان الثدي، مما يؤدي إلى هجرتها. إضافة ركيزة إلى كل لوحة ووضع لوحات على غرفة التصوير الإضاءة الحيوية.
الخلية السرطانية التي تعبر عن بروتين الإنارة الحيوية تتأكسد الركيزة وتنبعث منها الضوء. قياس الانتشار عن طريق قياس إجمالي الفوتونات المنبعثة من كل خلية باستخدام البرنامج. يجب أن تتكاثر الخلايا السرطانية في لوحة الاختبار بشكل أسرع من الخلايا الموجودة في لوحة التحكم. في البروتوكول التالي، سوف نقوم بزراعة خلايا سرطان الثدي المجاورة لنباتات عظم الفخذ لقياس انتشار خلايا الثدي.
لهذه التجربة، وإعداد تعليق خلايا سرطان الثدي مع 100،000 الخلايا لكل 50 ميكرولتر من DMEM بالإضافة إلى 10٪ FBS. وبالإضافة إلى ذلك، وإعداد المقابس من الشمع العظام لشل شظايا العظام. باستخدام نهايات قطع من طرف micropipette، وتخزين المقابس في طبق بتري. ثم مع ملقط نقل المقابس في لوحة من ستة آبار واستخدام قفاز معقم، اضغط على المقابس في موقف الساعة 12.
بعد ذلك ، ماصة 50 ميكرولتر من تعليق الخلية في وسط كل بئر. ضع اللوحة في حاضنة زراعة الأنسجة لمدة 45 دقيقة لتعزيز ارتباط الخلية. في حين أن لوحة تحتضن، استخراج شظايا العظام. مع الخلايا المرفقة لوحة، وضع شظايا الأنسجة العظمية على الشمع العظام في 3 آبار، واضغط على كل أسفل باستخدام rongeur. ثلاثة آبار بدون جزء تعمل كضوابط.
بعد ذلك ، أضف ببطء خمسة ملليلترات من DMEM بالإضافة إلى 10٪ FBS إلى جدار كل بئر. الشمع العظمي وشظايا العظام لا يجب أن تزيح ثم احتضان الثقافة لمدة 20 إلى 24 ساعة. في اليوم التالي، صورة الخلايا. أضف أولا 300 ميكروغرام لكل ملليلتر من لوسيفيرين إلى كل بئر ، ثم قم على الفور بتصوير اللوحة باستخدام منصة تصوير IVIS.
