Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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परीक्षण और नियंत्रण के रूप में लेबल दो सेल संस्कृति प्लेटों में हड्डी मोम का एक टुकड़ा रखकर शुरू करो । प्रत्येक प्लेट सेंटर में स्तन कैंसर कोशिकाओं को व्यक्त करने वाले बायोल्यूमिनेसेंस की उचित मात्रा पिपेट और सेल अटैचमेंट में सहायता करने के लिए एक विशिष्ट अवधि के लिए प्लेटों को इनक्यूबेट करें। टेस्ट प्लेट में बोन वैक्स पर एक छोटा सा बोन एक्सप्लांट रखें और प्रेशर लगाकर उसे सुरक्षित रखें।
धीरे-धीरे भ्रूण गोजातीय सीरम, एक विकास पूरक के साथ एक सेल संस्कृति माध्यम डालना, प्रत्येक प्लेट पक्ष के लिए एक विशिष्ट अवधि के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक्सप्लांट और इनक्यूबेट को जलमग्न करने के लिए। परीक्षण प्लेट में हड्डी के ऊतक घुलनशील कारकों को जारी करते हैं, जैसे साइटोकिन्स और एसआरसी किनेज़, जो स्तन कैंसर कोशिकाओं को आकर्षित करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप उनके प्रवास होते हैं। प्रत्येक प्लेट में एक सब्सट्रेट जोड़ें और प्लेटों को बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग कक्ष पर रखें।
बायोल्यूमिनेसेंट प्रोटीन व्यक्त करने वाली कैंसर सेल सब्सट्रेट को ऑक्सीकरण करती है और प्रकाश उत्सर्जित करती है। सॉफ्टवेयर का उपयोग कर प्रत्येक कोशिका द्वारा उत्सर्जित कुल फोटॉनों को मापने के द्वारा प्रसार की मात्रा निर्धारित करें। परीक्षण प्लेट में कैंसर कोशिकाओं को नियंत्रण प्लेट में कोशिकाओं की तुलना में तेजी से पैदा करना चाहिए। निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम स्तन कोशिका प्रसार को मापने के लिए फीमर बोन एक्सप्लांट से सटे स्तन कैंसर कोशिकाओं को सह-संस्कृति देंगे।
इस प्रयोग के लिए, डीएमईएम प्लस 10% एफबीएस के 50 माइक्रोलीटर प्रति 100,000 कोशिकाओं के साथ स्तन कैंसर सेल निलंबन तैयार करें। इसके अलावा, हड्डी के टुकड़ों को स्थिर करने के लिए हड्डी मोम के प्लग तैयार करें। माइक्रोपिपेट टिप के कट ऑफ सिरों का उपयोग करके, प्लग को पेट्री डिश में स्टोर करें। फिर संदंश के साथ प्लग को छह-अच्छी तरह से प्लेट में स्थानांतरित करें और बाँझ दस्ताने का उपयोग करके, प्लग को 12 बजे की स्थिति में दबाएं।
इसके बाद, प्रत्येक कुएं के केंद्र में सेल निलंबन के 50 माइक्रोलीटर पिपेट करें। सेल अटैचमेंट को बढ़ावा देने के लिए प्लेट को 45 मिनट के लिए टिश्यू कल्चर इनक्यूबेटर में रखें। जबकि प्लेट इनक्यूबेटिंग करते हैं, हड्डी के टुकड़े निकालते हैं। प्लेट से जुड़ी कोशिकाओं के साथ, हड्डी के ऊतकों के टुकड़ों को 3 कुओं में हड्डी के मोम पर रखें, और रोंगर का उपयोग करके प्रत्येक को दबाएं। टुकड़े के बिना तीन कुएं नियंत्रण के रूप में काम करते हैं ।
इसके बाद, धीरे-धीरे प्रत्येक कुएं की दीवार में डीएमईएम प्लस 10% एफबीएस के पांच मिलीलीटर जोड़ें। हड्डी मोम और हड्डी के टुकड़े उखाड़ नहीं होना चाहिए । फिर 20 से 24 घंटे तक संस्कृति को इनक्यूबेट करें। अगले दिन, कोशिकाओं की छवि। पहले प्रत्येक अच्छी तरह से लूसिफ़ेरिन के मिलीलीटर प्रति 300 माइक्रोग्राम जोड़ें, और फिर तुरंत एक आईविस इमेजिंग प्लेटफॉर्म के साथ प्लेट को इमेज करें।
