共同培养BC细胞：用骨片培育乳腺癌细胞，研究癌细胞增殖

首先将一块骨蜡放入两个标记为测试和控制的细胞培养板中。Pipette 在每个板中心适当量的生物发光表达乳腺癌细胞，并在特定时间内孵育板，以帮助细胞附着。在测试板的骨蜡上放置一个小骨释剂，并施加压力将其固定。

慢慢地将带有胎儿牛血清（生长补充剂）的细胞培养介质倒入每个板侧，在特定持续时间内在37摄氏度下浸入去植物并孵育。测试板中的骨组织释放出可溶性因子，如细胞因子和SRC激酶，它们会吸引乳腺癌细胞，导致它们的迁移。在每个板上添加一个基板，并将板放在生物发光成像室上。

表达生物发光蛋白的癌细胞氧化基质并发出光。使用软件测量每个单元格发射的总光子来量化增殖。测试板中的癌细胞的增殖速度应快于控制板中的细胞。在下列协议中，我们将共同培养与股骨外植相邻的乳腺癌细胞，以测量乳腺细胞增殖。

对于此实验，准备乳腺癌细胞悬浮与 100，000 细胞每 50 微升 DMEM 加上 10% FBS.此外，准备骨蜡插头，以固定骨骼碎片。使用微皮尖的切口端，将插头存放在培养皿中。然后用钳子将插头转移到六井板中，然后使用无菌手套，将插头按到 12 点钟的位置。

接下来，将50微升的移液器的细胞悬浮到每口井的中心。将盘子放在组织培养孵化器中45分钟，以促进细胞依恋。当盘子孵化时，提取骨头碎片。将细胞附着在板上，将骨组织碎片放在 3 口井的骨蜡上，然后使用荣格压下每个井。三口没有碎片的井充当控制装置。

接下来，在每个油井的墙壁上慢慢加入五毫升的DMEM加10%的FBS。骨蜡和骨头碎片不能脱落。然后孵育文化20至24小时。第二天，对细胞进行成像。首先在每口井中每毫升添加300微克的红素，然后立即使用 IVIS 成像平台对板进行成像。