شارك في زراعة خلايا BC: زراعة خلايا سرطان الثدي مع شظايا العظام لدراسة انتشار الخلايا السرطانية

1. شارك في زراعة خلايا سرطان الثدي المجاورة لشظايا العظام لقياس انتشار خلايا الثدي باستخدام BLI

1. قبل التجربة، قم بإعداد تعليق يحتوي على 2 × 10⁵ خلايا سرطان الثدي / 50 ميكرولتر، وإعداد المقابس من شمع العظام لشل شظايا العظام في الثقافة. قطع تلميح micropipette P200 إلى 3 قطع واستخدام نهاية ضيقة من أكبر قطعة بطريقة "قطع كوكي" لقطع قطع صغيرة (~ 35 ملغ) من الشمع العظام. استخدام نهاية واسعة من أصغر قطعة لإخراج شمع العظام المقابس في طبق بيتري للتخزين.
2. ضع قطعة من شمع العظام في موضع الساعة 12 لكل بئر واضغط برفق لأسفل بإصبع السبابة العقيمة القفاز.
3. ماصة 50 ميكرولتر من تعليق الخلية التي تحتوي على 1 × 10⁵ خلايا سرطان الثدي في DMEM-10٪ FBS + القلم-ستريب في وسط كل بئر من لوحة 6-جيدا. (بدلا من ذلك، خلايا البذور في نمط مشتتة إذا رغبت في ذلك.) ضع اللوحة في حاضنة زراعة أنسجة 37 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة لتعزيز ارتباط الخلية.
4. ضع جزء عظم واحد على قطعة واحدة من شمع العظام لكل بئر تجريبي وتطبيق ضغط لطيف مع rongeur لتأمينه. إجراء تجارب في ثلاثة الآبار بحيث يتم وضع 3 شظايا العظام من عينة THR معينة في الآبار الثلاثة الأولى، في حين أن الآبار الثلاثة السفلية تحتوي على شمع العظام فقط كضوابط.
5. باستخدام ماصة 5 مل، بلطف وببطء تقديم 5 مل من DMEM-10٪ FBS إلى جانب كل بئر لتجنب إزاحة خلايا الثدي أو شظايا العظام. ضع اللوحة في حاضنة زراعة الأنسجة 37 درجة مئوية لمدة 20-24 ساعة.
6. لإجراء التصوير الإضاءة الحيوية (BLI) إزالة لوحة من الحاضنة وإضافة ركيزة لوسيفيرين (لتحقيق تركيز 300 ميكروغرام / مل) إلى كل بئر. صورة لوحة فورا على منصة التصوير IVIS باستخدام المعلمات التالية: f-stop of 1، binning الصغيرة، وقت التعرض من 1 ثانية، المستوى D. قياس كثافة إشارة كل فضلا عن متوسط الإشراق (الفوتونات / الثانية / سنتيمتر مربع / steradian).
7. استخدم برنامج التصوير لتحديد المناطق ذات الاهتمام (ROI) لكمية متوسط الإشراق لجميع الآبار التجريبية والتحكمية. تصدير متوسط قيم التألق إلى ورقة Excel لتنفيذ الإحصائيات وإنشاء الرسوم البيانية.