Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Comience colocando un pedazo de cera ósea en dos placas de cultivo celular etiquetadas como prueba y control. Pipeta una cantidad adecuada de bioluminiscencia que expresa las células de cáncer de mama en cada centro de placa e incuba las placas durante una duración específica para ayudar a la fijación celular. Coloque una pequeña explanta ósea en la cera ósea en la placa de ensayo y asegure aplicando presión.
Vierta lentamente un medio de cultivo celular con suero bovino fetal, un suplemento de crecimiento, a cada lado de la placa para sumergir la explantación e incubar a 37 grados Celsius durante una duración específica. El tejido óseo de la placa de ensayo libera factores solubles, como las citoquinas y la quinasa SRC, que atraen a las células del cáncer de mama, lo que resulta en su migración. Agregue un sustrato a cada placa y coloque las placas en una cámara de imágenes de bioluminiscencia.
La célula cancerosa que expresa proteína bioluminiscente oxida el sustrato y emite luz. Cuantifique la proliferación midiendo el total de fotones emitidos por cada célula utilizando el software. Las células cancerosas de la placa de ensayo deben proliferar más rápido que las células de la placa de control. En el siguiente protocolo, co-cultivaremos células de cáncer de mama adyacentes a explantaciones óseas de fémur para medir la proliferación de células mamarias.
Para este experimento, prepara una suspensión celular de cáncer de mama con 100.000 células por cada 50 microlitros de DMEM más un 10% de FBS. Además, prepare tapones de cera ósea para inmovilizar los fragmentos óseos. Con los extremos cortados de una punta de micropipette, guarde los enchufes en una placa de Petri. Luego, con los fórceps transferir los enchufes en una placa de seis pozos y usando un guante estéril, presione los enchufes en la posición de las 12 en punto.
A continuación, pipeta 50 microlitros de la suspensión celular en el centro de cada pozo. Coloque la placa en una incubadora de cultivo de tejidos durante 45 minutos para promover el apego celular. Mientras la placa se incuba, extraiga los fragmentos óseos. Con las células unidas a la placa, coloque los fragmentos de tejido óseo en la cera ósea en 3 pozos y presione cada uno hacia abajo usando el rongeur. Tres pozos sin fragmento sirven como controles.
A continuación, agregue lentamente cinco mililitros de DMEM más un 10% de FBS a la pared de cada pozo. La cera ósea y los fragmentos óseos no deben ser desalojados. A continuación, incubar la cultura durante 20 a 24 horas. Al día siguiente, imagine las celdas. Primero agregue 300 microgramos por mililitro de luciferina a cada pozo, y luego imagine inmediatamente la placa con una plataforma de imágenes IVIS.
