Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Начните с размещения кусок костного воска в две пластины клеточной культуры помечены как тест и контроль. Pipette соответствующее количество биолюминесценции, выражают раковые клетки молочной железы в каждом центре пластины и инкубировать пластины в течение определенной продолжительности, чтобы помочь вложения клеток. Поместите небольшой костной эксплант на костном воске в тестовой пластине и закретуте его, применяя давление.
Медленно залить клеточной культуры среды с фетальной сыворотки крупного рогатого скота, рост дополнения, к каждой стороне пластины, чтобы погрузить explant и инкубировать при 37 градусов по Цельсию в течение определенной продолжительности. Костная ткань в тестовой пластине высвобождает растворимые факторы, такие как цитокины и киназы SRC, которые привлекают раковые клетки молочной железы, что приводит к их миграции. Добавьте субстрат к каждой пластине и поместите пластины на камеру биолюминесценции изображения.
Раковая клетка, выражаюющая биолюминесцентный белок, окисляет субстрат и излучает свет. Количественная оценка распространения путем измерения общего количества фотонов, испускаемых каждой ячейкой с помощью программного обеспечения. Раковые клетки в тестовой пластине должны размножаться быстрее, чем клетки в контрольной пластине. В следующем протоколе, мы будем совместно культуры раковых клеток молочной железы, прилегающих к бедренной кости эксплантов для измерения пролиферации клеток молочной железы.
Для этого эксперимента подготовьте подвеску раковых клеток молочной железы с 100 000 клеток на 50 микролитров DMEM плюс 10% FBS. Кроме того, подготовить пробки костного воска для обездвиживания фрагментов костей. Используя отрезанные концы наконечника микропайпета, храните вилки в чашке Петри. Затем с помощью типсов перенесите вилки в шестиясную пластину и с помощью стерильной перчатки нажмите на вилки в положении 12 часов.
Далее, пипетка 50 микролитров клеточной подвески в центр каждой хорошо. Поместите пластину в инкубатор культуры тканей в течение 45 минут для содействия клеточной привязанности. Пока пластина инкубирует, извлекайте фрагменты костей. С клетками, прикрепленными к пластине, поместите фрагменты костной ткани на костной воск в 3 колодцах, и нажмите каждый вниз с помощью rongeur. Три скважины без фрагмента служат в качестве элементов управления.
Далее, медленно добавить пять миллилитров DMEM плюс 10% FBS к стене каждой хорошо. Костной воск и фрагменты костей не должны быть выбиты. Затем инкубировать культуру в течение 20 до 24 часов. На следующий день, изображение клеток. Сначала добавьте 300 микрограммов на миллилитр люциферина в каждую колодец, а затем сразу же изображение пластины с IVIS изображения платформы.
