Инъекция хвостовой вены: метод администрирования раковых клеток для метастатических исследований в модели мыши

1. Инъекция хвостовых вен помеченных раковых клеток

ПРИМЕЧАНИЕ: Шаг 1.2.4 был оптимизирован для клеток 4T1, растущих в сингенеических мышах BALB/c. Если используются другие линии раковых клеток и штаммы мышей, количество вводимых клеток и длина анализа должны быть сначала оптимизированы.

1. Расширьте клеточные линии 4T1, генерируемые в шаге 2 на двух 15 см посуды в полных средствах роста, так что избыточные клетки доступны в день инъекции.
2. Подготовь клетки к инъекциям хвостовых вен следующим образом:
   1. Аспирировать средства массовой информации и промыть клеточные пластины с 1x PBS.
   2. Трипсинизировать клетки с 5 мл трипсина на 15 см пластины в течение 2-5 минут (клетки должны свободно смыть дно колодец). Перенесите все клетки в коническую трубку. Вымойте оставшиеся клетки из ткани культуры блюдо с достаточно полного роста средств массовой информации, чтобы утолить трипсина и добавить мыть в той же конической трубки.
   3. Подсчитайте ячейки с помощью автоматизированного счетчика ячеек, чтобы определить общий номер ячейки.
   4. Центрифуга клеток на 122 х г в течение 3 минут, аспирировать супернатант, и повторного незаменимия клеток в 1x PBS при желаемой концентрации. Здесь 2,5 х 10^{4 клетки} вводятся в каждую мышь в 100 МКЛ PBS, так что повторного перерасхода клеток на 2,5 х 10⁵ клеток / мл. Держите подвески клетки на льду до инъекции.
      ПРИМЕЧАНИЕ: важно ограничить количество времени между трипсинизацией клеток и инъекцией хвостовой вены примерно до 1 часа.
3. Ввешать клетки 4T1 из шага 1.2.5 в мышей через боковой хвост вены следующим образом:
   1. Работая в капюшоне на животном объекте, мягко, но тщательно смешать клетки путем инвертирования трубки или с помощью 1 мл шприца, чтобы убедиться, что они равномерно перерасход. Всегда убедитесь, что клетки перерасходуются до загрузки шприца.
   2. Загрузите шприц luer-lock 1 мл с клеточной подвеской и изгоните лишние пузырьки воздуха. Поместите 1/2 дюйма, 30-го калибра иглы на шприц с скошенной и изгнать пузырьки воздуха.
   3. Аккуратно поместите мышь в удержатель грызунов.
   4. Боковой хвост вены должны быть видны и расширены. Если нет, аккуратно ущипнуть основание хвоста и окунуть хвост в теплую водопроводную воду, чтобы расширить вены.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Расширение вен также может быть достигнуто путем размещения мыши клетке под лампой отопления и / или на верхней части грелки.
   5. Используйте спиртовую салфетку, чтобы очистить хвост. Вставьте иглу в хвостовую вену, скошенную сторону вверх и ввись 100 МКЛ клеточной подвески.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если игла правильно вставлена в вену, она должна легко скользить немного вперед и назад, и не должно быть сопротивления, когда поршень толкнул. Успешные инъекции должны также привести к "флеш", в котором синий цвет вены становится белым в течение нескольких секунд после инъекции.
4. Медленно снимите иглу и используя стерильную марлю, нанесите давление на место инъекции, чтобы остановить кровотечение.
5. Вернуть мышь в клетку и контролировать в течение 15 минут, чтобы обеспечить полное восстановление. Мыши должны быть проверены на наличие признаков боли или бедствия 3x еженедельно.
6. Мониторинг мышей для формирования метастазов и роста в течение 3-6 недель (клеточная линия и штамм мыши зависят) с помощью устройства визуализации живых животных in vivo (см. шаги 1.5 и 1.6).