Инъекция хвостовой вены: метод администрирования раковых клеток для метастатических исследований в модели мыши

Начните с добавления трипсина в чашку Петри, содержащую помеченные раковые клетки молочной железы, чтобы отделить их от поверхности. Добавьте среду, содержащую сыворотку, чтобы остановить действие трипсина. Перенесите подвеску клетки в коническую трубку и центрифугайте ее в гранулированную клетку.

Отбросьте супернатант и будем повторно поместить клетки в фосфатно-буферной солевой растворе. Поместите трубку на лед, чтобы замедлить метаболизм клеток. Загрузите эту клеточную подвеску, содержащую необходимое количество клеток в шприце luer lock, и зафиксв на ней иглу.

Поместите мышь в удержатель грызунов с хвостом снаружи. Опустите хвост в теплую воду, чтобы расширить вены. Есть две вены на боковых сторонах и артерии на брюшной стороне хвоста. Протрите хвост алкоголем, вставьте иглу и ввись в клеточную подвеску.

Попав в кровоток, инъекционные раковые клетки вторгаются в органы, такие как легкие, и размножаются. Медленно снимите иглу и используйте стерильную марлю на месте инъекции, чтобы оказать давление, чтобы остановить кровотечение. Верните мышь в клетку и обеспечим полное выздоровление. В следующем протоколе мы демонстрируем инъекцию помеченных метастатических раковых клеток в модель мыши для количественной оценки метастазов рака молочной железы и колонизации.

Аспирировать средства массовой информации и промыть пластины ячейки с 1X PBS. Трипсинизируете клетки с 5 миллилитров трипсина на 15-сантиметровую пластину в течение двух-пяти минут и перенесите все клетки в коническую трубку. Вымойте оставшиеся клетки из ткани культуры блюдо с достаточно полного роста средств массовой информации, чтобы утолить трипсина. Добавьте стирку в ту же коническую трубку. Подсчитайте ячейки с помощью автоматизированного счетчика ячеек, чтобы определить общий номер ячейки.

Затем центрифуга клетки в 122 раза G в течение трех минут и аспирировать супернатант. Повторное распределение клеток в 1X PBS при желаемой концентрации. Здесь, 25000 клеток вводятся в каждую мышь в 100 микролитров PBS, так что перерасход клеток находятся на 250000 клеток на миллилитр. Держите подвески клетки на льду до инъекции.

Работая в капюшоне на животном объекте, осторожно, но тщательно смешать клетки путем инвертирования трубки или с помощью 1-миллилитрового шприца, чтобы убедиться, что они равномерно перерасход. Теперь загрузите 1-миллилитровый шприц Luer блокировки с клеточной подвеской и изгнать избыток пузырьков воздуха. Поместите 1/2-дюймовый, 30-го калибра иглы на шприц с скошенной и изгнать пузырьки воздуха.

Аккуратно поместите мышь в удержатель грызунов. Боковой хвост вены должны быть видны и расширены. Если нет, аккуратно ущипнуть основание хвоста и окунуть хвост в теплую водопроводную воду, чтобы расширить вены. Используйте спиртовую салфетку, чтобы очистить хвост. Затем вставьте иглу в хвостовую вену, скошенную сторону вверх и ввись 100 микролитров клеточной подвески. Если игла правильно вставлена в вену, она должна легко скользить немного вперед и назад, и не должно быть сопротивления, когда поршень толкнул.

Успешные инъекции также должны привести к флеш, в котором синий цвет вены становится белым в течение нескольких секунд после инъекции. Медленно снимите иглу и, используя стерильную марлю, нанесите давление на место инъекции, чтобы остановить кровотечение. Вернуть мышь в клетку и контролировать в течение 15 минут, чтобы обеспечить полное восстановление.