尾静脈注射:マウスモデルにおける転移研究のための癌細胞の管理方法

1. 標識癌細胞の尾静脈注射

注: ステップ1.2.4は、同系BALB/cマウスで増殖する4T1細胞に最適化されています。他の癌細胞株およびマウス株が使用される場合、注入される細胞の数およびアッセイの長さは、まず最適化されるべきである。

1. 完全な成長培地で2つの15cmの皿にステップ2で生成された4T1細胞株を拡大して、注入の日に余分な細胞が利用できるようにします。
2. 次のように尾静脈注射のための細胞を準備します。
   1. 培地を吸引し、1x PBSで細胞板をすすいだ。
   2. トリプシンを15cmプレートあたり5mLで2〜5分間トリプシンします(細胞はウェルの底から自由にすすい出す必要があります)。すべての細胞を円錐形のチューブに移します。トリプシンをクエンチし、同じ円錐形のチューブに洗浄を追加するのに十分な完全な成長培地で組織培養皿から残りの細胞を洗浄します。
   3. セルの合計数を決定するために、自動セル カウンターを使用してセルをカウントします。
   4. 細胞を122xgで3分間遠心し、上清を吸引し、所望の濃度で1xPBS中の細胞を再懸濁した。ここでは、2.5 x 10^4個の細胞をPBSの100 μLで各マウスに注入し、2.5 x 10⁵細胞/mLで再懸濁細胞を行います。細胞懸濁液を射出するまで氷の上に置いてください。
      注: 細胞のトリプシン化と尾静脈注射の間の時間を約1時間に制限することが重要です。
3. ステップ 1.2.5 から 4T1 細胞を横の尾静脈を介してマウスに次のように注入します。
   1. 動物施設でフードで作業し、チューブを反転するか、1 mLシリンジを使用して細胞を穏やかに完全に混合し、均一に再懸濁されるようにします。注射器をロードする前に、セルが再び中断されていることを常に確認してください。
   2. セル懸濁液を使用して1 mLルアーロックシリンジをロードし、余分な気泡を排出します。ベベルを上げてシリンジに1/2インチ、30ゲージの針を置き、気泡を排出します。
   3. げっ歯類の拘束剤にマウスをそっと置きます。
   4. 横尾静脈は目に見えて拡張する必要があります。そうでなければ、尾の根元をそっとつまみ、尾を暖かい水道水に浸して静脈を拡張します。
      注: 静脈の拡張はまた、加熱ランプの下および/または加熱パッドの上にマウスケージを置くことによって達成することができる。
   5. アルコール拭き取りを使用して尾をきれいにします。針を尾静脈に挿入し、ベベル側を上にして、100 μLの細胞懸濁液を注入します。
      注: 針が静脈に適切に挿入されている場合、それは簡単にわずかに前後にスライドする必要があり、プランジャーを押しても抵抗があってはならない。成功した注射はまた、静脈の青い色が注射後数秒間白くなる「フラッシュ」をもたらすはずです。
4. ゆっくりと針を取り外し、滅菌ガーゼを使用して、注射部位に圧力をかけ、出血を止める。
5. マウスをケージに戻し、15分間監視して完全に回復します。マウスは、痛みや苦痛の徴候を毎週3倍チェックする必要があります。
6. in vivo生きた動物イメージング装置を用いて、3〜6週間の転移形成および成長のマウスを監視する(ステップ1.5および1.6を参照)。