Hale vene injeksjon: En metode for å administrere kreftceller for metastatiske studier i en musemodell

1. Hale vene injeksjon av merkede kreftceller

MERK: Trinn 1.2.4 er optimalisert for 4T1 celler som vokser i syngeneic BALB/c mus. Hvis andre kreftcellelinjer og musestammer brukes, bør antall celler som injiseres, og lengden på analysen først optimaliseres.

1. Utvid 4T1-cellelinjene som genereres i trinn 2 på to 15 cm retter i komplette vekstmedier, slik at overflødige celler er tilgjengelige på injeksjonsdagen.
2. Forbered cellene for hale vene injeksjon som følger:
   1. Aspirer mediet og skyll celleplatene med 1x PBS.
   2. Prøv cellene med 5 ml trypsin per 15 cm plate i 2-5 minutter (cellene skal skylle fritt av bunnen av brønnen). Overfør alle cellene til et konisk rør. Vask gjenværende celler fra vevskulturretten med nok komplette vekstmedier til å slukke trypsin og legge vasken til samme koniske rør.
   3. Tell cellene ved hjelp av en automatisert celleteller for å bestemme det totale cellenummeret.
   4. Sentrifuger cellene ved 122 x g i 3 minutter, aspirer supernatanten og resuspend cellene i 1x PBS ved ønsket konsentrasjon. Her injiseres 2,5 x 10⁴ celler i hver mus i 100 μL PBS, slik at resuspendcellene ved 2,5 x 10⁵ celler / ml. Hold cellesuspensjonene på is til injeksjon.
      MERK: Det er viktig å begrense tiden mellom trypsinisering av cellene og hale vene injeksjon til omtrent 1 time.
3. Injiser 4T1-celler fra trinn 1.2.5 i mus via sidehalevenen som følger:
   1. Arbeid i en hette på dyreanlegget, bland cellene forsiktig, men bland cellene grundig ved å invertere røret eller bruke en 1 ml sprøyte for å sikre at de er jevnt resuspendert. Sørg alltid for at cellene er resuspendert før du laster sprøyten.
   2. Legg en luerlåssprøyte på 1 ml med celleoppheng og utvis overflødige luftbobler. Plasser en 1/2 tommers, 30-gauge nål på sprøyten med skråkanten opp og utvis luftbobler.
   3. Plasser musen forsiktig i en gnagerbeherskelse.
   4. Laterale hale årer skal være synlige og utvidet. Hvis ikke, klem forsiktig bunnen av halen og dypp halen i varmt vann fra springen for å utvide venene.
      MERK: Utvidelse av venene kan også oppnås ved å plassere museburet under en varmelampe og / eller på toppen av en varmepute.
   5. Bruk en alkoholserviett til å rengjøre halen. Sett nålen inn i halevenen, skråsiden opp og injiser 100 μL celleoppheng.
      MERK: Hvis nålen er satt riktig inn i venen, skal den lett gli litt fremover og bakover, og det bør ikke være motstand når stempelet skyves. Vellykkede injeksjoner bør også resultere i en "flush" der den blå fargen på venen blir hvit i noen sekunder etter injeksjonen.
4. Fjern kanylen langsomt og bruk en steril gasbind, bruk trykk på injeksjonsstedet for å stoppe blødninger.
5. Returner musen til buret og overvåk i 15 minutter for å sikre full gjenoppretting. Mus bør kontrolleres for tegn på smerte eller nød 3x ukentlig.
6. Overvåk mus for metastasedannelse og vekst i 3-6 uker (cellelinje- og musestammeavhengig) ved hjelp av en in vivo levende dyreavbildningsenhet (se trinn 1,5 og 1,6).