Inyección de venas de cola: un método para administrar células cancerosas para estudios metastásicos en un modelo de ratón

1. Inyección de venas de cola de células cancerosas etiquetadas

NOTA: El paso 1.2.4 se ha optimizado para células 4T1 que crecen en ratones balb/c singenéticos. Si se utilizan otras líneas celulares cancerosas y cepas de ratón, primero se debe optimizar el número de células inyectadas y la duración del ensayo.

1. Expanda las líneas celulares 4T1 generadas en el paso 2 en dos platos de 15 cm en medios de crecimiento completos para que el exceso de células esté disponible el día de la inyección.
2. Prepare las células para la inyección de venas de cola de la siguiente manera:
   1. Aspirar los medios y enjuagar las placas celulares con 1x PBS.
   2. Trippinizar las células con 5 ml de trippsina por placa de 15 cm durante 2-5 minutos (las células deben enjuagar libremente la parte inferior del pozo). Transfiera todas las células a un tubo cónico. Lave las células restantes del plato de cultivo de tejido con suficiente medio de crecimiento completo para saciar la trypsina y agregar el lavado al mismo tubo cónico.
   3. Cuente las celdas mediante un contador de celdas automatizado para determinar el número total de celdas.
   4. Centrífuga las células a 122 x g durante 3 minutos, a aspire el sobrenadante y resuspend las células en 1x PBS a la concentración deseada. Aquí, se inyectan 2,5 x^{10 4} células en cada ratón en 100 μL de PBS, por lo que las células resuspend a 2,5 x 10⁵ células/ml. Mantenga las suspensiones celulares en hielo hasta la inyección.
      NOTA: es importante limitar la cantidad de tiempo entre la trippsinización de las células y la inyección de venas de cola a aproximadamente 1 hora.
3. Inyecte células 4T1 del paso 1.2.5 en ratones a través de la vena trasera lateral de la siguiente manera:
   1. Trabajando en una capucha en la instalación animal, mezcle suavemente pero a fondo las células invirtiendo el tubo o usando una jeringa de 1 ml para asegurarse de que se resuspended uniformemente. Asegúrese siempre de que las celdas se resuspended antes de cargar la jeringa.
   2. Cargue una jeringa de bloqueo luer de 1 ml con suspensión celular y expulse el exceso de burbujas de aire. Coloque una aguja de 1/2 pulgada y calibre 30 en la jeringa con el biselado hacia arriba y expulse las burbujas de aire.
   3. Coloque suavemente el ratón en un limitador de roedores.
   4. Las venas laterales de la cola deben ser visibles y dilatadas. Si no es así, pellizque suavemente la base de la cola y sumerja la cola en agua tibia del grifo para dilatar las venas.
      NOTA: La dilatación de las venas también se puede lograr colocando la jaula del ratón debajo de una lámpara de calefacción y/o encima de una almohadilla de calefacción.
   5. Use una toallita de alcohol para limpiar la cola. Inserte la aguja en la vena de la cola, bisele hacia arriba e inyecte 100 μL de suspensión celular.
      NOTA: Si la aguja se inserta correctamente en la vena, debe deslizarse fácilmente ligeramente hacia adelante y hacia atrás, y no debe haber resistencia cuando se empuja el émbolo. Inyecciones exitosas también deben resultar en un "rubor" en el que el color azul de la vena se vuelve blanco durante unos segundos después de la inyección.
4. Retire lentamente la aguja y con una gasa estéril, aplique presión al lugar de inyección para detener cualquier sangrado.
5. Devuelva el ratón a su jaula y monitoree durante 15 minutos para garantizar la recuperación completa. Los ratones deben ser revisados en busca de signos de dolor o angustia 3 veces por semana.
6. Monitoree ratones para la formación y crecimiento de metástasis durante 3-6 semanas (dependiente de la línea celular y la cepa del ratón) utilizando un dispositivo de imágenes animales vivos in vivo (ver pasos 1.5 y 1.6).