पूंछ नस इंजेक्शन: एक माउस मॉडल में मेटास्टैटिक अध्ययन के लिए कैंसर कोशिकाओं को प्रशासित करने के लिए एक विधि

1. लेबल कैंसर कोशिकाओं की पूंछ नस इंजेक्शन

नोट: सिनेनिक बाल्ब/सी चूहों में बढ़ने वाले 4T1 कोशिकाओं के लिए चरण 1.2.4 को अनुकूलित किया गया है। यदि अन्य कैंसर सेल लाइनों और माउस उपभेदों का उपयोग किया जाता है, तो इंजेक्शन वाली कोशिकाओं की संख्या, और परख की लंबाई को पहले अनुकूलित किया जाना चाहिए।

1. पूर्ण विकास मीडिया में दो 15 सेमी व्यंजन पर चरण 2 में उत्पन्न 4T1 सेल लाइनों का विस्तार करें ताकि इंजेक्शन के दिन अतिरिक्त कोशिकाएं उपलब्ध हों।
2. पूंछ नस इंजेक्शन के लिए कोशिकाओं को इस प्रकार तैयार करें:
   1. मीडिया को एस्पिरेट करें और 1x पीबीएस के साथ सेल प्लेटों को कुल्ला करें।
   2. 2-5 मिनट के लिए प्रति 15 सेमी प्लेट ट्राइप्सिन के 5 एमएल के साथ कोशिकाओं को ट्रिप्सिनाइज करें (कोशिकाओं को स्वतंत्र रूप से कुएं के नीचे कुल्ला करना चाहिए)। सभी कोशिकाओं को शंकु नली में स्थानांतरित करें। ट्राइप्सिन को बुझाने और एक ही शंकु नली में धोने को जोड़ने के लिए पर्याप्त पूर्ण विकास मीडिया के साथ ऊतक संस्कृति पकवान से शेष कोशिकाओं को धोएं।
   3. कुल सेल संख्या निर्धारित करने के लिए स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग करके कोशिकाओं की गणना करें।
   4. 3 मिनट के लिए 122 x ग्राम पर कोशिकाओं को अपकेंद्रित्र करें, सुपरनेट को एस्पारेट करें, और वांछित एकाग्रता पर 1x पीबीएस में कोशिकाओं को फिर से खर्च करें। यहां, 2.5 x 10⁴ कोशिकाओं को पीबीएस के 100 माइक्रोन में प्रत्येक माउस में इंजेक्ट किया जाता है, इसलिए 2.5 x 10⁵ कोशिकाओं/एमएल पर पुनर्सुस्ल कोशिकाओं को फिर से आता है। इंजेक्शन तक बर्फ पर सेल निलंबन रखें।
      नोट: कोशिकाओं के ट्राइसाइनाइजेशन और पूंछ नस इंजेक्शन के बीच लगभग 1 घंटे तक समय की मात्रा को सीमित करना महत्वपूर्ण है।
3. इस प्रकार पार्श्व पूंछ नस के माध्यम से चूहों में कदम 1.2.5 से 4T1 कोशिकाओं को इंजेक्ट करें:
   1. पशु सुविधा में एक हुड में काम करना, धीरे से लेकिन अच्छी तरह से ट्यूब उलटा या एक 1 मिलीएल सिरिंज का उपयोग करके कोशिकाओं को मिश्रण करने के लिए सुनिश्चित करें कि वे समान रूप से निलंबित कर रहे हैं । हमेशा सुनिश्चित करें कि सिरिंज लोड करने से पहले कोशिकाओं को फिर से निलंबित कर दिया जाता है।
   2. सेल निलंबन के साथ एक 1 एमएल Luer-लॉक सिरिंज लोड और अतिरिक्त हवा बुलबुले निष्कासित। बेवेल अप के साथ सिरिंज पर एक 1/2 इंच, 30 गेज सुई रखें और हवा के बुलबुले को निष्कासित करें।
   3. धीरे-धीरे माउस को कृंतक निरोधक में रखें।
   4. पार्श्व पूंछ की नसें दिखाई और फैली हुई होनी चाहिए। यदि नहीं, तो धीरे-धीरे पूंछ के आधार को चुटकी लें और नसों को फैलाने के लिए पूंछ को गर्म नल के पानी में डुबोएं।
      नोट: नसों के फैलाव भी एक हीटिंग लैंप के नीचे माउस पिंजरे रखकर और/या एक हीटिंग पैड के शीर्ष पर प्राप्त किया जा सकता है ।
   5. पूंछ को साफ करने के लिए अल्कोहल वाइप का उपयोग करें। सुई को पूंछ की नस में डालें, साइड अप करें, और सेल निलंबन के 100 माइक्रोन इंजेक्ट करें।
      नोट: यदि सुई को नस में ठीक से डाला जाता है, तो इसे आसानी से थोड़ा आगे और पीछे स्लाइड करना चाहिए, और प्लंजर को धक्का दिए जाने पर प्रतिरोध नहीं होना चाहिए। सफल इंजेक्शन भी एक "फ्लश" जिसमें नस का नीला रंग इंजेक्शन के बाद कुछ सेकंड के लिए सफेद हो जाता है में परिणाम चाहिए ।
4. धीरे-धीरे सुई को हटा दें और बाँझ धुंध का उपयोग करके, किसी भी रक्तस्राव को रोकने के लिए इंजेक्शन साइट पर दबाव लागू करें।
5. माउस को उसके पिंजरे में लौटाएं और पूर्ण वसूली सुनिश्चित करने के लिए 15 मिनट तक निगरानी करें। चूहों को दर्द या संकट 3x साप्ताहिक के लक्षणों के लिए जांच की जानी चाहिए।
6. वीवो लाइव एनिमल इमेजिंग डिवाइस (चरण 1.5 और 1.6 देखें) का उपयोग करके मेटास्टेसिस गठन और विकास के लिए चूहों की निगरानी करें