Svansvektion: En metod för att administrera cancerceller för metastaserade studier i en musmodell

1. Svansvektion av märkta cancerceller

OBS: Steg 1.2.4 har optimerats för 4T1 celler som växer i syngeneiska BALB/c möss. Om andra cancercelllinjer och musstammar används bör antalet injicerade celler och analysens längd först optimeras.

1. Expandera de 4T1-cellinjer som genereras i steg 2 på två 15 cm rätter i kompletta tillväxtmedier så att överflödiga celler finns tillgängliga på injektionsdagen.
2. Förbered cellerna för svansveinjektion enligt följande:
   1. Aspirera på mediet och skölj cellplattorna med 1x PBS.
   2. Trypsinize cellerna med 5 ml trypsin per 15 cm platta i 2-5 minuter (celler bör fritt skölja av botten av brunnen). Överför alla celler till ett koniskt rör. Tvätta återstående celler från vävnadskulturrätten med tillräckligt med kompletta tillväxtmedier för att släcka trypsinet och tillsätt tvätten i samma koniska rör.
   3. Räkna cellerna med hjälp av en automatiserad cellräknare för att bestämma det totala cellnumret.
   4. Centrifugera cellerna vid 122 x g i 3 minuter, aspirera supernatanten och återanvänd cellerna i 1x PBS vid önskad koncentration. Här injiceras 2,5 x 10⁴ celler i varje mus i 100 μL PBS, så återanvända celler vid 2,5 x 10⁵ celler/ml. Håll cellfjädringarna på is tills injektionen.
      OBS: Det är viktigt att begränsa tiden mellan trypsinisering av cellerna och svans ven injektionen till ungefär 1 timme.
3. Injicera 4T1 celler från steg 1.2.5 i möss via den laterala svans venen enligt följande:
   1. Arbeta i en huva på djuranläggningen, blanda försiktigt men noggrant cellerna genom att vända röret eller använda en 1 ml spruta för att säkerställa att de är jämnt återanvända. Se alltid till att cellerna återanvänds innan sprutan laddas.
   2. Ladda en 1 ml luerlåsspruta med cellfjädring och utvisa överflödiga luftbubblor. Placera en 1/2 tums 30-gauge nål på sprutan med avfasningen upp och utvisa luftbubblor.
   3. Placera försiktigt musen i en gnagarehållare.
   4. Laterala svansvener ska vara synliga och dilaterade. Om inte, nyp försiktigt svansens botten och doppa svansen i varmt kranvatten för att vidga venerna.
      OBS: Utvidgning av venerna kan också uppnås genom att placera musburen under en värmelampa och/eller ovanpå en värmeplatta.
   5. Använd en alkoholservett för att rengöra svansen. För in nålen i svans venen, avfasa sidan uppåt och injicera 100 μL cellfjädring.
      OBS: Om nålen sätts in ordentligt i venen ska den lätt glida något framåt och bakåt, och det bör inte finnas motstånd när kolven trycks in. Framgångsrika injektioner bör också resultera i en "spolning" där venens blå färg blir vit i några sekunder efter injektionen.
4. Ta långsamt bort nålen och använd en steril gasväv, tryck på injektionsstället för att stoppa blödning.
5. Sätt tillbaka musen i buret och övervaka i 15 minuter för att säkerställa full återhämtning. Möss bör kontrolleras för tecken på smärta eller ångest 3x varje vecka.
6. Övervaka möss för metastasering och tillväxt i 3-6 veckor (beroende på cellinje och musstam) med hjälp av en in vivo levande djuravbildningsanordning (se steg 1.5 och 1.6).