הזרקת וריד הזנב: שיטה לניהול תאים סרטניים למחקרים גרורתיים במודל עכבר

1. הזרקת וריד הזנב של תאים סרטניים מסומנים

שים לב: שלב 1.2.4 עבר אופטימיזציה עבור תאי 4T1 הגדלים בעכברי BALB/c סינגניים. אם נעשה שימוש בקווים אחרים של תאים סרטניים ובזני עכבר, מספר התאים המוזרקים ואורך ההסתעפות צריך להיות מותאם תחילה.

1. הרחב את קווי התא 4T1 שנוצרו בשלב 2 על שתי מנות 15 ס"מ במדיית צמיחה מלאה, כך תאים עודפים זמינים ביום ההזרקה.
2. הכן את התאים להזרקת וריד הזנב כדלקמן:
   1. לשאוף את המדיה ולשטוף את לוחות התא עם 1x PBS.
   2. טריפסיניזציה התאים עם 5 מ"ל של טריפסין לכל צלחת 15 ס"מ במשך 2-5 דקות (תאים צריכים לשטוף בחופשיות את החלק התחתון של הבאר). להעביר את כל התאים לצינור חרוט. לשטוף את התאים הנותרים מצלחת תרבית הרקמה עם מספיק מדיה צמיחה מלאה כדי להרוות את טריפסין ולהוסיף את הכביסה לאותו צינור חרוט.
   3. ספירת התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי כדי לקבוע את מספר התא הכולל.
   4. צנטריפוגה התאים ב 122 x g במשך 3 דקות, לשאוף את supernatant, ולהשתעלות מחדש את התאים 1x PBS בריכוז הרצוי. כאן, 2.5 x 10⁴ תאים מוזרקים לתוך כל עכבר ב 100 μL של PBS, כך תאים resuspend ב 2.5 x 10⁵ תאים / מ"ל. שמור את המתלים התא על קרח עד הזרקה.
      הערה: חשוב להגביל את משך הזמן בין טריפסיניזציה של התאים לבין הזרקת וריד הזנב בערך 1 שעה.
3. הזרק 4T1 תאים משלב 1.2.5 לעכברים דרך וריד הזנב לרוחב כדלקמן:
   1. עבודה במכסה המנוע במתקן בעלי החיים, בעדינות אך ביסודיות לערבב את התאים על ידי היפוך הצינור או באמצעות מזרק 1 מ"ל כדי להבטיח כי הם resuspended אחיד. ודא תמיד שהתאים מנוצלים מחדש לפני טעינת המזרק.
   2. לטעון מזרק 1 מ"ל לואר-נעילה עם המתלה התא לגרש בועות אוויר עודף. מניחים 1/2 אינץ', 30 מד מחט על המזרק עם שיפוע למעלה לגרש בועות אוויר.
   3. הנח בעדינות את העכבר במרסן מכרסמים.
   4. ורידי הזנב לרוחב צריכים להיות גלויים ומו מורחבים. אם לא, בעדינות לצבוט את הבסיס של הזנב לטבול את הזנב במי ברז חמים כדי ל מורחב את הוורידים.
      שים לב: מורחבת של הוורידים עשויה להיות מושגת גם על ידי הנחת כלוב העכבר מתחת למנורה חימום ו / או על גבי כרית חימום.
   5. השתמש במגבון אלכוהול כדי לנקות את הזנב. הכנס את המחט לתוך וריד הזנב, צד שיפוע למעלה, ולהזריק 100 μL של השעיית התא.
      שים לב: אם המחט מוכנס כראוי לתוך הווריד, זה צריך בקלות להחליק מעט קדימה ואחורה, ולא צריכה להיות התנגדות כאשר הכוכנה נדחפת. זריקות מוצלחות צריך גם לגרום "סומק" שבו הצבע הכחול של הווריד הופך לבן במשך כמה שניות לאחר ההזרקה.
4. לאט להסיר את המחט באמצעות גזה סטרילית, להפעיל לחץ על אתר ההזרקה כדי לעצור את כל הדימום.
5. להחזיר את העכבר לכלוב שלה לפקח במשך 15 דקות כדי להבטיח התאוששות מלאה. עכברים צריכים להיבדק סימנים של כאב או מצוקה 3x שבועי.
6. נטר עכברים להיווצרות וצמיחה של גרורות במשך 3-6 שבועות (קו תאים ותלוי במתח עכבר) באמצעות מכשיר הדמיה של בעלי חיים חיים in vivo (ראה שלבים 1.5 ו- 1.6).