Tail Vein Injection: Eine Methode zur Verabreichung von Krebszellen für metastatische Studien in einem Mausmodell

1. Schwanzveneninjektion von markierten Krebszellen

HINWEIS: Schritt 1.2.4 wurde für 4T1-Zellen optimiert, die in syngenischen BALB/c-Mäusen wachsen. Wenn andere Krebszelllinien und Mausstämme verwendet werden, sollten zuerst die Anzahl der injizierten Zellen und die Länge des Assays optimiert werden.

1. Erweitern Sie die in Schritt 2 erzeugten 4T1-Zelllinien auf zwei 15 cm großen Schalen in kompletten Wachstumsmedien, so dass am Tag der Injektion überschüssige Zellen zur Verfügung stehen.
2. Bereiten Sie die Zellen für die Injektion der Schwanzvene wie folgt vor:
   1. Aspirieren Sie die Medien und spülen Sie die Zellplatten mit 1x PBS.
   2. Trypsinisieren Sie die Zellen mit 5 ml Trypsin pro 15 cm Platte für 2-5 Minuten (Zellen sollten frei abspülen die Unterseite des Brunnens). Übertragen Sie alle Zellen in ein konisches Rohr. Waschen Sie die verbleibenden Zellen aus der Gewebekulturschale mit genügend vollständigen Wachstumsmedien, um das Trypsin zu löschen und fügen Sie die Wäsche in das gleiche konische Rohr.
   3. Zählen Sie die Zellen mithilfe eines automatisierten Zellenzählers, um die Gesamtzahl der Zellen zu bestimmen.
   4. Zentrifugieren Sie die Zellen 3 Minuten lang bei 122 x g, aspirieren Sie den Überstand und setzen Sie die Zellen in 1x PBS in der gewünschten Konzentration wieder aus. Hierwerden werden 2,5 x 10⁴ Zellen in jede Maus in 100 l PBS injiziert, so dass die Resuspendzellen bei 2,5 x 10⁵ Zellen/ml. Halten Sie die Zellsuspensionen bis zur Injektion auf Eis.
      HINWEIS: Es ist wichtig, die Zeit zwischen der Trypsinisierung der Zellen und der Schwanzveneninjektion auf etwa 1 Stunde zu begrenzen.
3. Injizieren Sie 4T1-Zellen aus Schritt 1.2.5 in Mäuse über die laterale Schwanzvene wie folgt:
   1. Arbeiten Sie in einer Haube in der Tieranlage, mischen Sie die Zellen sanft, aber gründlich, indem Sie das Rohr invertieren oder eine 1 ml Spritze verwenden, um sicherzustellen, dass sie gleichmäßig resuspendiert werden. Stellen Sie immer sicher, dass die Zellen vor dem Beladen der Spritze resuspendiert werden.
   2. Laden Sie eine 1 ml Luer-Lock Spritze mit Zellsuspension und vertreiben Sie überschüssige Luftblasen. Legen Sie eine Nadel mit 1,2 Zoll und 30-Spur auf die Spritze mit der Abschrägung und vertreiben Sie Luftblasen.
   3. Legen Sie die Maus vorsichtig in einen Nagetier-Restrainer.
   4. Die seitlichen Schwanzvenen sollten sichtbar und erweitert sein. Wenn nicht, kneifen Sie vorsichtig die Basis des Schwanzes und tauchen Sie den Schwanz in warmes Leitungswasser, um die Venen zu verdünnen.
      HINWEIS: Die Erweiterung der Venen kann auch erreicht werden, indem der Mauskäfig unter einer Heizlampe und/oder auf einem Heizkissen platziert wird.
   5. Verwenden Sie ein Alkoholtuch, um den Schwanz zu reinigen. Setzen Sie die Nadel in die Schwanzvene ein, fasen Sie seite nach oben, und injizieren Sie 100 l Zellsuspension.
      HINWEIS: Wenn die Nadel richtig in die Vene eingeführt wird, sollte sie leicht nach vorne und hinten gleiten, und es sollte kein Widerstand vorhanden sein, wenn der Kolben gedrückt wird. Erfolgreiche Injektionen sollten auch zu einem "Flush" führen, bei dem die blaue Farbe der Vene für einige Sekunden nach der Injektion weiß wird.
4. Entfernen Sie langsam die Nadel und mit einer sterilen Gaze, Druck auf die Injektionsstelle ausüben, um jede Blutung zu stoppen.
5. Bringen Sie die Maus in ihren Käfig und Monitor für 15 Minuten, um eine vollständige Wiederherstellung zu gewährleisten. Mäuse sollten 3x wöchentlich auf Anzeichen von Schmerzen oder Schmerzen überprüft werden.
6. Überwachen Sie Mäuse 3-6 Wochen lang auf Metastasenbildung und -wachstum (Zelllinie und Mausstammabhängig) mit einem in vivo Live-Tierbildgebungsgerät (siehe Schritte 1.5 und 1.6).