Injection de veines de queue : méthode d’administration des cellules cancéreuses pour les études métastatiques dans un modèle murin

1. Injection de veines de queue de cellules cancéreuses étiquetées

REMARQUE: L’étape 1.2.4 a été optimisée pour les cellules 4T1 qui poussent chez des souris SYNGENEIC BALB/c. Si d’autres lignées de cellules cancéreuses et des souches de souris sont utilisées, le nombre de cellules injectées et la longueur de l’essai doivent d’abord être optimisés.

1. Étendre les lignées cellulaires 4T1 générées à l’étape 2 sur deux plats de 15 cm dans un média de croissance complet afin que les cellules excédentaires soient disponibles le jour de l’injection.
2. Préparez les cellules à l’injection de veines de queue comme suit :
   1. Aspirer le média et rincer les plaques cellulaires avec 1x PBS.
   2. Essayez les cellules avec 5 mL de trypsine par plaque de 15 cm pendant 2-5 minutes (les cellules doivent rincer librement le fond du puits). Transférer toutes les cellules dans un tube conique. Lavez les cellules restantes du plat de culture tissulaire avec suffisamment de supports de croissance complets pour étancher la trypsine et ajouter le lavage au même tube conique.
   3. Comptez les cellules à l’aide d’un compteur cellulaire automatisé pour déterminer le nombre total de cellules.
   4. Centrifuger les cellules à 122 x g pendant 3 minutes, aspirer le supernatant, et resuspendre les cellules en 1x PBS à la concentration désirée. Ici, 2,5 x 10⁴ cellules sont injectées dans chaque souris dans 100 μL de PBS, de sorte que les cellules de réanimation à 2,5 x 10⁵ cellules /mL. Garder les suspensions cellulaires sur la glace jusqu’à l’injection.
      REMARQUE : il est important de limiter à environ 1 heure le temps entre la trypsinisation des cellules et l’injection de veines de la queue.
3. Injecter des cellules 4T1 à partir de l’étape 1.2.5 chez la souris par l’intermédiaire de la veine latérale de la queue comme suit:
   1. En travaillant dans une hotte à l’installation animale, mélangez doucement mais soigneusement les cellules en inversant le tube ou en utilisant une seringue de 1 mL pour s’assurer qu’elles sont uniformément résuspendées. Assurez-vous toujours que les cellules sont résuspendées avant de charger la seringue.
   2. Chargez une seringue luer-lock de 1 mL avec la suspension cellulaire et expulsez les bulles d’air excédentaires. Placez une aiguille de 1/2 po de calibre 30 sur la seringue avec le biseau vers le haut et expulsez les bulles d’air.
   3. Placez doucement la souris dans un restrainer de rongeur.
   4. Les veines latérales de la queue doivent être visibles et dilatées. Sinon, pincez doucement la base de la queue et trempez la queue dans l’eau chaude du robinet pour dilater les veines.
      REMARQUE: La dilatation des veines peut également être obtenue en plaçant la cage à souris sous une lampe chauffante et/ou au-dessus d’un coussin chauffant.
   5. Utilisez un lingette à alcool pour nettoyer la queue. Insérez l’aiguille dans la veine de la queue, bevel côté vers le haut, et injecter 100 μL de suspension cellulaire.
      REMARQUE: Si l’aiguille est insérée correctement dans la veine, elle doit facilement glisser légèrement vers l’avant et vers l’arrière, et il ne devrait pas y avoir de résistance lorsque le piston est poussé. Les injections réussies devraient également entraîner une « chasse d’eau » dans laquelle la couleur bleue de la veine devient blanche pendant quelques secondes après l’injection.
4. Retirez lentement l’aiguille et à l’aide d’une gaze stérile, appliquez une pression sur le site d’injection pour arrêter tout saignement.
5. Remettre la souris dans sa cage et surveiller pendant 15 minutes pour assurer un rétablissement complet. Les souris doivent être vérifiées pour les signes de douleur ou de détresse 3 fois par semaine.
6. Surveiller la formation et la croissance des souris pendant 3 à 6 semaines (lignée cellulaire et souche de souris dépendantes) à l’aide d’un dispositif d’imagerie animale vivante in vivo (voir les étapes 1.5 et 1.6).