Injection de veines de queue : méthode d’administration des cellules cancéreuses pour les études métastatiques dans un modèle murin

Commencez par ajouter de la trypsine dans une boîte de Pétri contenant des cellules cancéreuses du sein étiquetées pour les détacher de la surface. Ajouter le sérum contenant du milieu pour arrêter l’action de la trypsine. Transférer la suspension cellulaire dans un tube conique et la centrifuger dans une cellule à granulés.

Jetez le supernatant et réutilisez les cellules dans une solution saline tamponnée de phosphate. Placez le tube sur la glace pour ralentir le métabolisme cellulaire. Chargez cette suspension cellulaire contenant la quantité requise de cellules dans une seringue de verrouillage Luer et fixez une aiguille dessus.

Placez une souris dans un restrainer de rongeur avec sa queue à l’extérieur. Tremper la queue dans de l’eau chaude pour dilater les veines. Il y a deux veines sur les côtés latéraux et une artère sur le côté ventral de la queue. Essuyer la queue avec de l’alcool, insérer l’aiguille et injecter la suspension cellulaire.

Une fois dans le sang, les cellules cancéreuses injectées envahissent les organes, comme les poumons, et prolifèrent. Retirez lentement l’aiguille et utilisez une gaze stérile sur le site d’injection pour appliquer une pression pour arrêter le saignement. Remettre la souris dans sa cage et assurer une récupération complète. Dans le protocole suivant, nous démontrons l’injection des cellules cancéreuses métastatiques étiquetées dans un modèle de souris pour quantifier la métastase et la colonisation de cancer du sein.

Aspirer le média et rincer les plaques cellulaires avec 1X PBS. Essayez les cellules avec 5 millilitres de trypsine par plaque de 15 centimètres pendant deux à cinq minutes et transférez toutes les cellules dans un tube conique. Lavez les cellules restantes du plat de culture tissulaire avec suffisamment de supports de croissance complets pour étancher la trypsine. Ajouter le lavage au même tube conique. Comptez les cellules à l’aide d’un compteur cellulaire automatisé pour déterminer le nombre total de cellules.

Ensuite, centrifuger les cellules à 122 fois G pendant trois minutes et aspirer le supernatant. Resuspendez les cellules en 1X PBS à la concentration désirée. Ici, 25.000 cellules sont injectées dans chaque souris dans 100 microlitres de PBS, de sorte que les cellules résuspendues sont à 250.000 cellules par millilitre. Garder les suspensions cellulaires sur la glace jusqu’à l’injection.

Travailler dans une hotte à l’installation animale, mélanger doucement, mais soigneusement les cellules en inversant le tube ou en utilisant une seringue de 1 millilitre pour s’assurer qu’elles sont uniformément résuspendues. Maintenant, chargez une seringue de verrouillage Luer de 1 millilitre avec suspension cellulaire et expulser les bulles d’air excédentaires. Placez une aiguille de 1/2 po et de calibre 30 sur la seringue avec le biseau vers le haut et expulsez les bulles d’air.

Placez doucement la souris dans un restrainer de rongeur. La veine latérale de la queue doit être visible et dilaté. Sinon, pincez doucement la base de la queue et trempez la queue dans l’eau chaude du robinet pour dilater les veines. Utilisez un lingette à alcool pour nettoyer la queue. Puis insérez l’aiguille dans la veine de la queue, bevel côté vers le haut, et injecter 100 microlitres de suspension cellulaire. Si l’aiguille est insérée correctement dans la veine, elle doit facilement glisser légèrement vers l’avant et vers l’arrière, et il ne devrait pas y avoir de résistance lorsque le piston est poussé.

Les injections réussies devraient également entraîner une chasse d’eau, dans laquelle la couleur bleue de la veine devient blanche pendant quelques secondes après l’injection. Retirez lentement l’aiguille et, à l’aide d’une gaze stérile, appliquez une pression sur le site d’injection pour arrêter tout saignement. Remettre la souris dans sa cage et surveiller pendant 15 minutes pour assurer un rétablissement complet.