Hale vene Injektion: En metode til at administrere kræftceller for metastatiske undersøgelser i en mus Model

1. Hale vene injektion af mærkede kræftceller

BEMÆRK: Trin 1.2.4 er optimeret til 4T1 celler, der vokser i syngeneic BALB/c mus. Hvis der anvendes andre kræftcellelinjer og musestammer, skal antallet af injicerede celler og analysens længde først optimeres.

1. Udvid de 4T1 cellelinjer, der genereres i trin 2 på to 15 cm retter i komplette vækstmedier, så overskydende celler er tilgængelige på injektionsdagen.
2. Forbered cellerne til hale vene injektion som følger:
   1. Indsug mediet og skyl cellepladerne med 1x PBS.
   2. Trypsiniser cellerne med 5 mL trypsin pr. 15 cm plade i 2-5 minutter (celler skal frit skylle bunden af brønden). Overfør alle cellerne til et konisk rør. Vask de resterende celler fra vævskulturskålen med nok komplette vækstmedier til at slukke trypsin og tilsæt vask til det samme koniske rør.
   3. Tæl cellerne ved hjælp af en automatiseret celletæller for at bestemme det samlede cellenummer.
   4. Centrifuge cellerne ved 122 x g i 3 minutter, aspirere supernatanten og genbruge cellerne i 1x PBS ved den ønskede koncentration. Her injiceres 2,5 x 10⁴ celler i hver mus i 100 μL PBS, så de genanvendelige celler ved 2,5 x 10⁵ celler/mL. Hold celleaffjedringerne på is indtil injektionen.
      BEMÆRK: Det er vigtigt at begrænse tiden mellem trypsinisering af cellerne og haleåreindsprøjtningen til ca. 1 time.
3. Indsprøjt 4T1 celler fra trin 1.2.5 i mus via lateral haleåren som følger:
   1. Arbejd i en hætte på dyrefaciliteten, bland forsigtigt, men grundigt cellerne ved at vende røret eller bruge en 1 mL sprøjte for at sikre, at de genbruges ensartet. Sørg altid for, at cellerne genbruges, inden sprøjten læsses.
   2. Lad en 1 mL Luer-lock sprøjte med celleaffjedring og udvise overskydende luftbobler. Placer en 1/2 tommer, 30-gauge nål på sprøjten med facet op og udvise luftbobler.
   3. Placer forsigtigt musen i en gnaver restrainer.
   4. Sideårerne skal være synlige og udvidede. Hvis ikke, skal du forsigtigt klemme bunden af halen og dyppe halen i varmt vand fra hanen for at udvide venerne.
      BEMÆRK: Dilation af venerne kan også opnås ved at placere museburet under en varmelampe og/eller oven på en varmepude.
   5. Brug en alkohol tørre til at rense halen. Indslut nålen i haleåren, facetsiden op, og indsprøjt 100 μL celleaffjedring.
      BEMÆRK: Hvis nålen er sat korrekt i venen, skal den let glide lidt frem og tilbage, og der bør ikke være modstand, når stemplet skubbes. Vellykkede injektioner bør også resultere i en "flush", hvor venens blå farve bliver hvid i et par sekunder efter injektionen.
4. Fjern langsomt nålen og brug en steril gasbind, tryk på injektionsstedet for at stoppe blødninger.
5. Vend musen tilbage til buret, og overvåg den i 15 minutter for at sikre fuld restitution. Mus bør kontrolleres for tegn på smerte eller angst 3x ugentligt.
6. Monitorer mus for metastasedannelse og vækst i 3-6 uger (cellelinje- og musestammeafhængig) ved hjælp af en in vivo-billedanordning til levende dyr (se trin 1.5 og 1.6).