Hale vene Injektion: En metode til at administrere kræftceller for metastatiske undersøgelser i en mus Model

Start med at tilføje trypsin i en petriskål, der indeholder mærkede brystkræftceller for at løsne dem fra overfladen. Tilføj medium, der indeholder serum for at stoppe virkningen af trypsin. Overfør celleaffjedringen til et konisk rør og centrifuge det til pellet celle.

Supernatanten kasseres, og cellerne genbruges i fosfatbufferet saltvand. Placer røret på is for at bremse cellemetabolismen. Læg denne celleaffjedring, der indeholder den nødvendige mængde celler, i en Luer-låsesprøjte, og fastgør en nål på den.

Placer en mus i en gnaver restrainer med halen udenfor. Dyp halen i varmt vand for at udvide venerne. Der er to vener på sidesiderne og en arterie på den ventrale side af halen. Tør halen med alkohol, indsæt nålen, og injicere celleaffjedringen.

En gang i blodbanen invaderer de injicerede kræftceller i organer, såsom lungerne, og formerer sig. Fjern langsomt nålen og brug en steril gasbind på injektionsstedet til at lægge pres på for at stoppe blødningen. Sæt musen tilbage i buret, og sørg for fuld restitution. I den følgende protokol demonstrerer vi injektion af mærkede metastatiske kræftceller i en musemodel for at kvantificere brystkræftmetastase og kolonisering.

Indsug mediet og skyl cellepladerne med 1X PBS. Trypsiniser cellerne med 5 milliliter trypsin pr. 15 centimeter plade i to til fem minutter og overfør alle cellerne til et konisk rør. Vask de resterende celler fra vævskulturen fad med nok komplet vækst medier til at slukke trypsin. Tilsæt vasken til det samme koniske rør. Tæl cellerne ved hjælp af en automatiseret celletæller for at bestemme det samlede cellenummer.

Dernæst centrifuge cellerne ved 122 gange G i tre minutter og aspirere supernatanten. Resuspend cellerne i 1X PBS ved den ønskede koncentration. Her injiceres 25.000 celler i hver mus i 100 mikroliter AF PBS, så de genanvendelige celler er ved 250.000 celler pr. Milliliter. Hold celleaffjedringerne på is indtil injektionen.

Arbejde i en hætte på dyrefaciliteten, forsigtigt, men grundigt blande cellerne ved at vende røret eller bruge en 1-milliliter sprøjte for at sikre, at de er ensartet genbruges. Læg nu en 1-milliliter Luer-låsesprøjte med celleaffjedring og udvisk overskydende luftbobler. Placer en 1/2-tommer, 30-gauge nål på sprøjten med facet op og udvise luftbobler.

Placer forsigtigt musen i en gnaver restrainer. Den laterale haleåre skal være synlig og udvidet. Hvis ikke, skal du forsigtigt klemme bunden af halen og dyppe halen i varmt vand fra hanen for at udvide venerne. Brug en alkohol tørre til at rense halen. Sæt derefter nålen ind i halen vene, facet side op, og injicere 100 mikroliter af celle suspension. Hvis nålen er sat korrekt i venen, skal den let glide lidt frem og tilbage, og der bør ikke være modstand, når stemplet skubbes.

Vellykkede injektioner bør også resultere i en flush, hvor venens blå farve bliver hvid i et par sekunder efter injektionen. Fjern langsomt nålen, og tryk på injektionsstedet ved hjælp af en steril gaze for at stoppe blødningen. Vend musen tilbage til buret, og overvåg den i 15 minutter for at sikre fuld restitution.