الكشف عن الببتيد المرتبط بجين الكالسيتونين (CGRP) وقياسه في البلازما البشرية باستخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم المعدل

الببتيد المرتبط بجين الكالسيتونين (CGRP) هو ببتيد عصبي مكون من 37 حمضا أمينيا موجودا في الألياف العصبية مع توطين حول الأوعية الدموية وكذلك الأنسجة غير العصبية. يشترك شكلان من CGRP ، α- و β-CGRP ، في أكثر من 90٪ من التماثل ويتشاركان الوظائف الفسيولوجية. ومع ذلك ، تم العثور على αCGRP في الجهاز العصبي المركزي والمحيطي ، بينما تم العثور على βCGRP في الجهاز العصبي المعوي ^1,2. عند تنشيط مستقبلات الألم والإخراج الخلوي المعتمد على الكالسيوم ، يتم إطلاق CGRP من الخلايا العصبية ، مما يؤدي إلى التهاب عصبي معقم يتضمن توسع الأوعية الشريانية وتسرب بروتين البلازما³،⁴،⁵،^6،7. من هنا ، يظهر CGRP في الأوعية بعد الشعيرات الدموية وقد يكون علامة حيوية للأمراض التي تسبب تنشيط مسبب للألم ، مثل الصداع النصفي⁸،⁹،^10،11. وتجدر الإشارة إلى أن CGRP متورط أيضا في COVID-19 من خلال دوره في تكوين الأوعية الدموية والتعديل المناعي ، وقد يتنبأ بتطور المرض غير المواتي^12,13. وبالتالي ، فإن بروتوكول القياس الكمي الدقيق ل CGRP في البلازما البشرية يمكن أن يكون له قيمة واسعة.

ربما تم إيلاء أكبر قدر من الاهتمام لدور CGRP في الصداع النصفي. استنادا إلى الدراسات قبل السريرية والسريرية ، تم طرح CGRP كمؤشر حيوي محتمل للصداع النصفي وكهدف للعلاج³،⁴،⁵،⁶،⁷،⁸،^9،10. وجدت بعض الدراسات ارتفاعا في CGRP في الأفواج المصابة بالصداع النصفي العرضي بالنسبة للمشاركين في^{المجموعة 10}،^14،15. يبدو أن نجاح مثبطات CGRP في التجارب السريرية لعلاج الصداع النصفي ينطوي على ارتفاع CGRP كعامل مسبب للصداع النصفي. ومع ذلك ، لم يؤكد جميع المحققين هذه النتائج¹⁶،¹⁷،^18،19. علاوة على ذلك ، لم يتم بعد توضيح دور CGRP في أعراض الصداع النصفي غير الصداع. كان الدافع وراء العمل الحالي هو الرغبة في فهم دور CGRP في الأعراض الدهليزية للصداع النصفي.

قد تكون بيانات المقايسة المناعية CGRP غير المتسقة في الأدبيات ناتجة عن عدة أسباب. أولا ، عمر النصف ل CGRP في الأوعية الدموية المحيطية هو 6.9 دقيقة 20 ، بسبب نشاط بروتياز سيرين 21 ، والإنزيمات المهينة للأنسولين وغيرها من الميتالوبروتياز 22 ، والإندوببتيداز المحايد 23 ، والإنزيم المحول للإندوثيلين -1 ²⁴. ثانيا ، لم يتم وصف التفاصيل الفنية المتغيرة للمقايسات المناعية المستخدمة لتحديد CGRP بشكل كامل في مثل هذه الدراسات. أخيرا ، يؤدي عدم توحيد منهجية المقايسة المناعية إلى تعقيد الصورة أكثر.

توضح هذه المقالة بروتوكول مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم المعدل (ELISA) الذي يسمح بالتنقية والقياس الكمي الدقيق ل α و βCGRP في البلازما البشرية. لا تتفاعل الأجسام المضادة للمجموعة مع الأميلين أو الكالسيتونين أو المادة P. خضع هذا البروتوكول لتجارب التحقق اللازمة ، مثل الارتفاع والاسترداد وخطية التخفيف ، والتي يتم تقديم البيانات الخاصة بها هنا. لم يتم وصف بروتوكول CGRP ELISA هذا الذي خضع للتحقق من الصحة بشكل كامل في الأدبيات. يمكن استخدام هذا البروتوكول لتحديد CGRP في البلازما البشرية في سياق الصداع النصفي وكذلك أمراض القلب 2,25 ، الأمراض الجلدية 26 ، التوليد 27 ، الروماتيزم^28,29 ، الجهاز العضلي الهيكلي 30,31 ، الغدد الصماء ^32,33 ، والأمراض الفيروسية ^12,13 التي تورط فيها CGRP.