Detección y cuantificación del péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP) en plasma humano mediante un ensayo inmunoabsorbente modificado ligado a enzimas

El péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP) es un neuropéptido de 37 aminoácidos que está presente en fibras neuronales con localización perivascular, así como en tejidos no neuronales. Las dos formas de CGRP, α- y β-CGRP, comparten más del 90% de homología y comparten funciones fisiológicas; sin embargo, la αCGRP se encuentra en el sistema nervioso central y periférico, mientras que la βCGRP se encuentra en el sistema nervioso entérico ^1,2. Tras la activación de los nociceptores y la exocitosis dependiente de calcio, CGRP se libera de las neuronas, induciendo inflamación neurogénica estéril que involucra vasodilatación arterial y extravasación de proteínas plasmáticas 3,4,5,6,7. A partir de aquí, CGRP aparece en los vasos postcapilares y puede ser un biomarcador para enfermedades que causan activación nociceptiva aferente, como la migraña 8,9,10,11. Cabe destacar que CGRP también ha sido implicado en COVID-19 a través de su papel en la angiogénesis y la modulación inmune, y puede predecir la evolución desfavorable de la enfermedad^12,13. Por lo tanto, un protocolo para la cuantificación precisa de CGRP en plasma humano podría tener un valor amplio.

La mayor atención se ha prestado quizás al papel de CGRP en la migraña. Sobre la base de estudios preclínicos y clínicos, CGRP se ha presentado como un posible biomarcador para la migraña y como un objetivo para el tratamiento 3,4,5,6,7,8,9,10. Algunos estudios han encontrado una elevación de CGRP en cohortes con migraña episódica en relación con los participantes control^10,14,15. El éxito de los inhibidores de CGRP en ensayos clínicos para el tratamiento de la migraña parece implicar CGRP elevada como un factor causal para las migrañas. Sin embargo, no todos los investigadores han corroborado estos resultados^16,17,18,19. Además, el papel de CGRP en los síntomas de migraña sin dolor de cabeza aún no se ha dilucidado; el trabajo actual fue motivado por el deseo de comprender el papel de CGRP en los síntomas vestibulares de la migraña.

Los datos inconsistentes de inmunoensayo CGRP en la literatura podrían deberse a varias razones. En primer lugar, la vida media de CGRP en la vasculatura periférica es de 6,9 min 20, debido a la actividad de las serina proteasas 21, enzimas degradadoras de insulina y otras metaloproteasas 22, endopeptidasas neutras 23 y enzima convertidora de endotelina-1 ²⁴. En segundo lugar, los detalles técnicos variables de los inmunoensayos utilizados para cuantificar CGRP no se describen completamente en dichos estudios. Finalmente, la falta de estandarización de la metodología de inmunoensayo complica aún más el panorama.

Este artículo describe un protocolo de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas modificado (ELISA) que permite la purificación y cuantificación precisa de α y βCGRP en plasma humano. Los anticuerpos del kit no son reactivos cruzados con amilina, calcitonina o sustancia P. Este protocolo ha sido sometido a los experimentos de validación necesarios, como el pico y la recuperación y la linealidad de la dilución, cuyos datos se presentan aquí. Tal protocolo ELISA CGRP que ha sido objeto de validación no ha sido descrito previamente en la literatura. Este protocolo se puede utilizar para cuantificar CGRP en plasma humano en el contexto de la migraña, así como cardiológicas^2,25, dermatológicas 26, obstétricas 27, reumatológicas^28,29, musculoesqueléticas 30,31, endocrinas ^32,33 y virales^12,13 en las que CGRP ha sido implicada.