50 % Haemolytic 보완 (CH 측정 50) 활동
Summary
고전 경로는 항체에 의해 활성화되고 대상 세포 용해에 culminates 있습니다. CH<sub> 50</sub> 검정은 혈청 샘플의 보완 활동의 측정을 제공합니다. 이 비디오는 CH를 결정에 관련된 단계를 설명합니다<sub> 50</sub> 혈청 샘플의 결과의 계산 및 해석.
Abstract
보완 시스템은 세포 용해를 대상으로 이끌 활성화되고 opsonisation 통해 phagocytosis을 용이하게 단백질의 그룹입니다. 개인 보완 구성 요소가 있지만 이것은 경로의 활동에 같은 정보를 제공하지 않습니다 계량하실 수 있습니다. CH<sub> 50</sub> 클래식 보완 경로 (그림 1)의 정품 인증에 대한 심사 분석하고 그것은 경로의 모든 구성 요소의 감소, 부재 및 / 또는 비활성으로 구분합니다. CH<sub> 50</sub> 토끼 안티 양 적혈구 세포 항체 (haemolysin)로 사전 코팅 양 적혈구 (SRBC)을 lyse하는 고전 경로의 혈청 보완 구성 요소의 기능 능력을 테스트합니다. 항체 – 코팅 SRBC은 시험 혈청, 보완의 고전 경로가 활성화되고 haemolysis 결과 incubated 때. 보완 구성 요소가 없을 경우, CH<sub> 50</sub> 레벨 제로합니다, 전통적인 경로 중 하나 이상의 구성 요소가 감소하는 경우, CH<sub> 50</sub>가 감소됩니다. 최적 sensitized SRBC의 고정 볼륨은 각 혈청 희석에 추가됩니다. 부화 후, 혼합물은 centrifuged되고 haemolysis의 정도는 540nm에서 뜨는로 출시 헤모글로빈의 흡광도를 측정하여 계량입니다. 보완 활동의 금액은 항체 코팅 SRBC을 lyse에 혈청 검사의 다양한 dilutions의 용량을 검사에 의해 결정됩니다. 이 비디오는 고전적인 보완 경로의 보완 활동의 수준을 분석에 관련된 실험 단계를 설명합니다.
Protocol
Discussion
CH 50 검정은 많은 interferences의 적용을받습니다. 일부 SRBC는 활동을 보완하기 위해 무관 자연 haemolysis의 결과로, 다른 사람보다 더 연약하고 있습니다. 토끼 항체의 친화도는 많은에서 많은 한 제조 업체에서 다른 다릅니다, 이것은 SRBC에 바인딩 항체의 양을 영향을 미칩니다. 또한, 항체 코팅 SRBC의 다양한 양의와 세포 항체 결과 SRBC을 sensitizing의 과정. 표본 수집 및 저장 오류의 중요한 잠?…
Acknowledgements
저자는 촬영에 대한 기술과 미스터 폴 목사는 수행 미스 로라 매튜스를 감사하고 싶습니다. 이 프로젝트는 사우스 오스트 레일 리아 대학, 연구소의 의학 프로그램에 의해 투자되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
