מדידת משלים Haemolytic 50% (CH 50) פעילות של סרום
Summary
מסלול קלאסי מופעל על ידי נוגדן ו לשיאו תמוגה תא היעד. CH<sub> 50</subAssay> מספק מדד הפעילות משלימים מדגם בסרום. סרט הווידאו הזה ממחיש את שלבים בקביעת CH<sub> 50</sub> מדגם בסרום, החישובים ופענוח התוצאות.
Abstract
מערכת המשלים היא קבוצה של חלבונים אשר מופעלים כאשר להוביל היעד תמוגה התא ומקל phagocytosis דרך opsonisation. רכיבים משלימים הפרט ניתן לכמת אך זה אינו מספק כל מידע על הפעילות של מסלול. CH<sub> 50</sub> הוא assay סינון עבור הפעלה של מסלול משלים קלאסי (איור 1) והוא רגיש לירידה, העדר ו / או חוסר פעילות של רכיב כלשהו של מסלול. CH<sub> 50</sub> בדיקות יכולת תפקודית של רכיבים משלימים בסרום של מסלול קלאסי lyse אדום דם תאים כבשים (SRBC) מראש מצופה נוגדן ארנבת אנטי כבשים אדום דם תאים (haemolysin). כאשר נוגדן מצופה SRBC מודגרת עם מבחן בסרום, המסלול הקלאסי של המשלים מופעל תוצאות haemolysis. אם רכיב משלים הוא נעדר, CH<sub> 50</subרמה> יהיה אפס, אם אחד או יותר מרכיבים של מסלול קלאסי הם ירדו, CH<sub> 50</sub> תהיה ירידה. נפח קבוע של SRBC רגיש בצורה אופטימלית מתווסף דילול כל בסרום. לאחר דגירה, התערובת centrifuged ומידת haemolysis היא לכמת ידי מדידת ספיגת המוגלובין מתפזרות supernatant ב 540nm. סכום פעילות משלימים נקבעת על ידי בחינת היכולת של דילולים שונים של בדיקה בסרום כדי lyse SRBC נוגדן מצופה. וידאו זה מתאר את הצעדים הכרוכים בניתוח ניסיוני רמת הפעילות משלימים של מסלול המשלים הקלאסית.
Protocol
Discussion
Assay 50 CH כפוף הפרעות רבות. SRBC כמה הם שבירים יותר מאחרים, וכתוצאה מכך haemolysis ספונטנית כי הוא לא קשור כדי להשלים פעילות. הזיקה של הנוגדן ארנב משתנה הרבה הרבה מיצרן אחד למשנהו; זה משפיע על כמות נוגדן אשר נקשר SRBC. כמו כן, תהליך של רגישות SRBC עם תוצאות הנוגדנים בתאים עם כמו?…
Acknowledgements
המחבר מבקש להודות מיס לורה מתיוס לביצוע הטכניקה ומר פול שפרד עבור הצילום. פרויקט זה מומן על ידי אוניברסיטת דרום אוסטרליה, תוכנית המעבדה לרפואה.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
