قياس يكمل 50 ٪ الدم الانحلالي (CH 50) نشاط المصل
Summary
يتم تنشيط المسار الكلاسيكي بواسطة الأجسام المضادة ويتوج في انحلال الخلايا المستهدفة. وCH<sub> 50</sub> مقايسة يوفر قدرا من النشاط مكملا لعينة مصل. هذا الفيديو يوضح الخطوات التي ينطوي عليها تحديد CH<sub> 50</sub> عينة مصل ، والحسابات وتفسير النتائج.
Abstract
نظام تكمل مجموعة من البروتينات التي تؤدي الى تنشيط عندما تحلل الخلايا المستهدفة ويسهل من خلال البلعمة opsonisation. ويمكن قياس مكونات تكمل الفردية ولكن هذا لا يوفر أي معلومات عن نشاط المسار. وCH<sub> 50</sub> هو فحص الكشف عن تفعيل الممر تكمل الكلاسيكية (الشكل رقم 1) وأنه حساس في الحد ، وغياب و / أو الخمول أي مكون من الطريق. وCH<sub> 50</sub> اختبارات القدرة الفنية لمكونات مصل لاستكمال المسار الكلاسيكي لليز خلايا الدم الحمراء الأغنام (SRBC) قبل المغلفة مع الغنم الحمراء المضادة للأرنب الدم الأضداد الخلية (haemolysin). عندما يتم تحضين الضد المغلفة SRBC مع اختبار المصل ، يتم تنشيط المسار الكلاسيكي لتكمل والنتائج haemolysis. إذا كان مكونا مكملا غائب ، CH<sub> 50</sub> سوف يكون مستوى الصفر ، وإذا انخفضت هي واحدة أو أكثر من مكونات المسار الكلاسيكية ، CH<sub> 50</subوسيتم انخفضت>. يتم إضافة وحدة تخزين ثابتة من SRBC توعيتهم على النحو الأمثل لتخفيف كل مصل. بعد الحضانة ، يتم طرد الخليط وكميا درجة haemolysis عن طريق قياس الامتصاصية من الهيموغلوبين يطلق في طاف في 540nm. يتم تحديد مقدار النشاط تكملة طريق فحص قدرة تخفيفات مختلفة من اختبار المصل على الضد ليز SRBC المغلفة. هذا الفيديو يبين الخطوات التجريبية تشارك في تحليل مستوى النشاط استكمالا للمسار استكمال الكلاسيكية.
Protocol
Discussion
50 CH مقايسة يخضع لتدخلات كثيرة. بعض SRBC هي أكثر هشاشة من غيرها ، مما أدى إلى haemolysis العفوية التي لا علاقة لتكملة النشاط. تقارب من الأضداد الأرنب يختلف من الكثير والكثير لمن مصنع واحد لآخر ، وهذا يؤثر على كمية من الأجسام المضادة التي تربط لSRBC. أيضا ، فإن عملية توعية SRB…
Acknowledgements
ويود الكاتب أن أشكر الآنسة لورا ماثيوز لأداء هذه التقنية ، والسيد بول الراعي لصناعة السينما. وقد تم تمويل هذا المشروع من قبل جامعة جنوب أستراليا ، مختبر برنامج الطب.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
