Измерение 50% Гемолитическая Дополнение (CH 50) Активность сыворотки
Summary
Классический путь активируется антител и достигает высшей точки в целевую лизис клетки. CH<sub> 50</sub> Анализ позволяет определить дополнять активность сыворотки. Это видео демонстрирует этапы определения CH<sub> 50</sub> Из сыворотки, расчетов и интерпретация результатов.
Abstract
Системы комплемента представляет собой группу белков, которые при активации приводит к лизису клетки-мишени и облегчает фагоцитоз через opsonisation. Отдельные компоненты дополнения могут быть количественно однако это не дает никакой информации о деятельности путем. CH<sub> 50</sub> Является скрининг-тест для активации классического пути комплемента (рис. 1), и она чувствительна к сокращению, отсутствие и / или бездействия какого-либо компонента пути. CH<sub> 50</sub> Тесты функциональных возможностей компонентов сыворотки дополнение классический путь для лизиса эритроцитов барана (ЭБ), предварительно покрытой кролика против овец красные клетки крови антител (гемолизин). Когда антителами ЭБ инкубируют с тестовыми сыворотки, классический путь комплемента активируется и гемолиз результаты. Если компонента комплемента отсутствует, CH<sub> 50</sub> Уровня будет равен нулю, если один или несколько компонентов классического пути уменьшаются, CH<sub> 50</sub> Будет уменьшаться. Фиксированного объема оптимально сенсибилизированных ЭБ добавляется к каждому разведения сывороток. После инкубации смесь центрифугируют и степень гемолиза можно измерить с помощью измерения поглощения гемоглобина выпущены в надосадочной на 540нм. Количество дополнением деятельности определяется путем анализа потенциала различных разведений сыворотки тест лизировать покрытые антителом ЭБ. Это видео описывает экспериментальные этапы анализа уровня комплемента деятельности классического пути комплемента.
Protocol
Discussion
CH 50 анализа подлежит много помех. Некоторые ЭБ более хрупки, чем другие, в результате спонтанного гемолиза, что не имеет отношения к дополнять деятельность. Сродство антител кролика варьируется от партии к партии и от одного производителя к другому, это влияет на количество антит?…
Acknowledgements
Автор хотел бы поблагодарить мисс Лора Мэтьюз для выполнения техники и г-н Пол Пастырь для кинематографа. Этот проект был профинансирован из Университета Южной Австралии, Лабораторная медицина программы.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
