Summary

Измерение 50% Гемолитическая Дополнение (CH 50) Активность сыворотки

Published: March 29, 2010
doi:

Summary

Классический путь активируется антител и достигает высшей точки в целевую лизис клетки. CH<sub> 50</sub> Анализ позволяет определить дополнять активность сыворотки. Это видео демонстрирует этапы определения CH<sub> 50</sub> Из сыворотки, расчетов и интерпретация результатов.

Abstract

Системы комплемента представляет собой группу белков, которые при активации приводит к лизису клетки-мишени и облегчает фагоцитоз через opsonisation. Отдельные компоненты дополнения могут быть количественно однако это не дает никакой информации о деятельности путем. CH<sub> 50</sub> Является скрининг-тест для активации классического пути комплемента (рис. 1), и она чувствительна к сокращению, отсутствие и / или бездействия какого-либо компонента пути. CH<sub> 50</sub> Тесты функциональных возможностей компонентов сыворотки дополнение классический путь для лизиса эритроцитов барана (ЭБ), предварительно покрытой кролика против овец красные клетки крови антител (гемолизин). Когда антителами ЭБ инкубируют с тестовыми сыворотки, классический путь комплемента активируется и гемолиз результаты. Если компонента комплемента отсутствует, CH<sub> 50</sub> Уровня будет равен нулю, если один или несколько компонентов классического пути уменьшаются, CH<sub> 50</sub> Будет уменьшаться. Фиксированного объема оптимально сенсибилизированных ЭБ добавляется к каждому разведения сывороток. После инкубации смесь центрифугируют и степень гемолиза можно измерить с помощью измерения поглощения гемоглобина выпущены в надосадочной на 540нм. Количество дополнением деятельности определяется путем анализа потенциала различных разведений сыворотки тест лизировать покрытые антителом ЭБ. Это видео описывает экспериментальные этапы анализа уровня комплемента деятельности классического пути комплемента.

Protocol

Подготовка 5x веронал буферного раствора (VBS) Для подготовки веронал буферного раствора (VBS), три отдельных решения должны быть подготовлены. Подготовка раствора 1, растворяя 21.25gm из NaCl и 0.94gm натрия Barbitone в 350 мл дистиллированной воды. Конечные концентрации NaCl и натрия Barbitone явля?…

Discussion

CH 50 анализа подлежит много помех. Некоторые ЭБ более хрупки, чем другие, в результате спонтанного гемолиза, что не имеет отношения к дополнять деятельность. Сродство антител кролика варьируется от партии к партии и от одного производителя к другому, это влияет на количество антит?…

Acknowledgements

Автор хотел бы поблагодарить мисс Лора Мэтьюз для выполнения техники и г-н Пол Пастырь для кинематографа. Этот проект был профинансирован из Университета Южной Австралии, Лабораторная медицина программы.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Sheep red blood cells   CSL 2490201 Use at 1% final
Serum       Human serum
Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated   AdB Serotec C12HSB  
96 well flat bottom plate   Sarstedt 83.1839  
Veronal buffered saline       Use at 1x final
Waterbath        
Plate reader        
37°C room/incubator        

References

  1. Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. . Immunology. , (2003).

Play Video

Cite This Article
Costabile, M. Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum. J. Vis. Exp. (37), e1923, doi:10.3791/1923 (2010).

View Video