Medir o Complemento de 50% hemolítica (CH ₅₀) Atividade de soro

O sistema complemento é um grupo de proteínas que, quando ativado levar a meta a lise das células e facilita a fagocitose através opsonisation. Componentes do complemento individual pode ser quantificado no entanto, este não fornece qualquer informação sobre a atividade da via. O CH₅₀ É um ensaio de triagem para a ativação da via clássica do complemento (Fig. 1) e é sensível à redução, ausência e / ou inatividade de qualquer componente da via. O CH₅₀ Testa a capacidade funcional de componentes do complemento sérico da via clássica para lisar hemácias de carneiro (SRBC) pré-revestida com anticorpos de coelho anti-células vermelhas do sangue de ovelhas (hemolisina). Quando revestidos com anticorpo SRBC são incubadas com soro de teste, a via clássica do complemento é ativado e os resultados hemólise. Se um componente do complemento está ausente, o CH<sub> 50</subNível> será zero, se um ou mais componentes da via clássica estão diminuídas, o CH₅₀ Vai ser diminuída. Um volume fixo de SRBC ideal sensibilizados é adicionado a cada diluição do soro. Após a incubação, a mistura é centrifugada eo grau de hemólise é quantificada pela medida da absorbância da hemoglobina liberada no sobrenadante a 540 nm. A quantidade de atividade complementar é determinada examinando a capacidade de várias diluições do soro de ensaio para lisar SRBC revestidas de anticorpo. Este vídeo descreve os passos envolvidos na análise experimental do nível de atividade complementar da via clássica do complemento.