Misura del Complemento 50% emolitica (CH 50) Attività di siero
Summary
La via classica è attivata da anticorpi e culmina nella lisi delle cellule bersaglio. Il CH<sub> 50</subTest> fornisce una misura dell'attività complemento di un campione di siero. Questo video dimostra i passi coinvolti nella determinazione del CH<sub> 50</sub> Di un campione di siero, i calcoli e l'interpretazione dei risultati.
Abstract
Il sistema del complemento è un gruppo di proteine che, quando attivato portare a bersaglio la lisi cellulare e facilita la fagocitosi attraverso opsonisation. Componenti complementari individuali possono essere quantificati comunque questo non fornisce alcuna informazione circa l'attività della via. Il CH<sub> 50</sub> È un test di screening per l'attivazione della via classica del complemento (Fig. 1) ed è sensibile alla riduzione, assenza e / o di inattività di qualsiasi componente del percorso. Il CH<sub> 50</sub> Verifica la capacità funzionale dei componenti del complemento del siero della via classica per lisare i globuli rossi di pecora (GRP) pre-rivestiti con coniglio anti-pecora anticorpi dei globuli rossi (emolisina). Quando legate agli anticorpi SRBC vengono incubati con siero, la via classica del complemento si attiva ed i risultati emolisi. Se un componente complementare è assente, il CH<sub> 50</subLivello> sarà pari a zero, se uno o più componenti della via classica sono diminuiti, il CH<sub> 50</sub> Sarà diminuito. Un volume fisso di GRP sensibilizzati in modo ottimale è aggiunto ad ogni diluizione del siero. Dopo l'incubazione, la miscela viene centrifugata e il grado di emolisi viene quantificato misurando l'assorbanza della emoglobina rilasciato nel supernatante a 540nm. La quantità di attività complementare viene determinata esaminando la capacità delle varie diluizioni del siero per lisare SRBC rivestiti di anticorpi. Questo video illustra le fasi sperimentali coinvolti nell'analizzare il livello di attività complemento della via classica del complemento.
Protocol
Discussion
Il CH 50 saggio è soggetta a molte interferenze. Alcuni SRBC sono più fragili di altre, con conseguente emolisi spontanea che non è correlata a completare l'attività. L'affinità degli anticorpi di coniglio varia da lotto a lotto e da un costruttore all'altro, questo influisce sulla quantità di anticorpo che si lega alla GRP. Inoltre, il processo di sensibilizzazione SRBC con risultati anticorpi nelle cellule con quantità diverse di rivestimento degli anticorpi del GRP. Raccolta dei campioni…
Acknowledgements
L'autore desidera ringraziare la signorina Lora Matthews per eseguire la tecnica e il signor Paolo Pastore per la cinematografia. Questo progetto è stato finanziato dalla University of South Australia, il programma di Medicina di Laboratorio.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sheep red blood cells | CSL | 2490201 | Use at 1% final | |
| Serum | Human serum | |||
| Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated | AdB Serotec | C12HSB | ||
| 96 well flat bottom plate | Sarstedt | 83.1839 | ||
| Veronal buffered saline | Use at 1x final | |||
| Waterbath | ||||
| Plate reader | ||||
| 37°C room/incubator |
