マルチモーダル相変化ポルフィリン滴の合成と特性解析

1. 脱水脂質フィルム 必要なシェルコンポーネントの質量を計算します(補足ファイル「脂質式シート」を参照)。注: このプロトコルの場合、 シェル組成物は、10モル%1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-5000]アンモニウム塩(DSPE-PEG5K)、xモル%ピロフェオフォア 1-ステアロイル-2-ヒドロキシ-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(パイロ-SPC)、および(90 – x)モル% 1,2-ディステアロイル-snグリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)。 パイロSPCの量は、7つのシェル組成物(x = 0、1、10、20、30、40、50)にわたって変化します。ストックボトルのDSPE-PEG5Kの分子量を確認してください。 最低体積1 mLの任意の脂質ボリュームにプロトコルをスケーリングします。このプロトコルでは、全脂質濃度が1mg/mLの10mLの総脂質体積を全ての製剤に使用した。賦形液は、10%プロピレングリコール、10%グリセロール、および80%リン酸緩衝液生理食塩水(PBS、1X、7.4 pH)(%v/v/v/v)(ステップ2.3および「脂質式シート」を参照)になります。注:パイロ脂質の合成プロトコルは、補足ファイル「その他のプロトコルとデータ」ステップS1からS1.19に概説され、これは鄭ららによって行われた作業から変更された。 計算された質量(ステップ1.1および「脂質式シート」を参照)に基づいて、非パイロ脂質のそれぞれを計量し、スクリューオンキャップ付きの十分なサイズのホウケイ酸ガラスバイアルに移ります。 バイアルをキャップし、キャップとバイアルにラベルを付け、脂質バイアルの底部と壁をアルミニウム箔で覆います。このバイアルは、プロトコルの残りの部分については「脂質バイアル」と呼ばれます。脂質バイアルは、涼しく乾燥した暗い領域に保管してください。 製剤にパイロ-SPCが含まれている場合は、10 mgのパイロ-SPCドライフィルム(「その他のプロトコルとデータ」を参照)をクロロホルムの1 mLに溶解します。5sの渦は、吸光度を測定し、脂質バイアルに加える適切な体積を計算する。注意: クロロホルムは健康被害、刺激性、毒性があります。保護ラボコート、目の保護、手袋を着用し、煙を吸い込むのを避けてください。注:Pyro-SPCは光に敏感であるため、パイロ-SPCを扱う際に可能であれば作業領域のライトを減らしてください。Pyro-SPCを密閉し、使用しないときに覆われておいてください。 紫外線可視分光光度計では、0.5 nm単位で800nmから300nmまでの波長範囲の吸光度を測定し、互換性のある1cmパス長キュベットで2000 μLの純粋メタノールでベースラインを測定します。注意: メタノールは健康の危険、刺激性、毒性、および可燃性です。保護ラボコート、目の保護、手袋を着用し、煙を吸い込むのを避けてください。火花や熱から遠ざけてください。 2000 μLのメタノールにクロロホルムで2 μL、30秒の渦に2μLを加えます。清潔で互換性のある1cmキュベットに移し、吸光度を測定します。紫外線可視分光光度計の吸光度範囲から667nmで吸光度がピークに達した場合は、この希釈倍率を調整してください。注: クロロホルムやメタノールを転送する場合は、正確性を高めるため、機械ピペットではなく、清潔なガラス注射器または正変位ピペットを使用してください。 ステップ 1.4.2 をさらに 2 回繰り返して、3 重の吸光度値を取得します。 667 nmで吸光度ピーク値を平均し、脂質バイアル14、15に必要なクロロホルムでパイロ-SPCの体積を計算するために次の式を使用します。Vは、必要なクロロホルムのパイロSPCの体積である、 mはパイロ-SPCの必要質量(ステップ1.1および「脂質式シート」を参照)、Mは1040.317 g・mol-1でパイロ-SPCの分子量であり、Aは667nmでの平均吸光度、dはクロロホルム体積のメタノールおよびピロ-SPCに基づく希釈係数である(ステップ1.4.2)。 Lは1cmでキュベット経路長、εは45000L·1·cm-1でパイロ-SPCの667nmモル減衰係数である。注:方程式の分母は、溶液中の検体の濃度を距離を超えて測定された光学吸光度に関連付けるビール・ランバート法です。 きれいなガラスの注射器(図1A)を使用して脂質バイアルに前のステップからクロロホルムでパイロ-SPCの計算された容積を加え、次いで、バイアルをキャップしてカバーします。注: 図1 は、30%のパイロ脂質製剤のみを示しています。 クロロホルムにパイロ-SPCが残っている場合:ヒュームフードで、ステップ1.4からパイロSPC+クロロホルムバイアルをアンキャップし、バイアルを側に部分的に傾け、パイロSPC/クロロホルムバイアルにできるだけ穏やかに窒素ガスを流し続けます。バイアルを回転させて窒素ガスの流れを利用してクロロホルムを乾燥させ、パイロ-SPCをバイアルの内壁に均等にコーティングして乾燥させます。スプラッシュが作成されず、ソリューションが脱落しないようにします。 パイロ-SPCの脂質フィルムが乾燥してバイアルの壁にコーティングされたら、窒素ガスの流れをオフにします。バイアルをキャップし、バイアルネックをワックスフィルムで密封し、バイアルを-20°Cと暗闇の中に保管します。 90%クロロホルムと10%メタノール(%v/v)の溶液を調製し、脂質バイアルに5 mLを加えます。脂質バイアルをキャップし、内容物を均質化するためにそっと旋回する(図1B)。注:製剤にホスファチジン酸脂質(例えば1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3リン酸ナトリウム塩(DSPA))が含まれている場合は、60%クロロホルム、32%メタノール、および8%二重脱イオン水(%v/v/v)を脂質バイアルに追加します。より強い旋回は、脂質内容物を完全に溶解するために必要な場合がある。 ヒュームフードでは、脂質バイアルをアンキャップし、部分的に脂質バイアルをその側に傾け、脂質バイアルにできるだけ穏やかに窒素ガスを流し続けます。脂質バイアルを回転させて、窒素ガスの流れを利用して溶液を乾燥させ、脂質バイアルの内壁に均一にコーティングして乾燥させます。スプラッシュが作成されず、ソリューションが脱落しないようにします。 脂質が乾燥して脂質バイアルの内壁にコーティングされたら(図1C)、窒素ガスの流れを止め、脂質バイアルの底部と壁をアルミニウム箔で覆い、上部開口部を通気用の針で数個の穴で突き刺したアルミニウム箔で覆います(図1D)。 覆われた脂質バイアルを真空デシケーターの中にラベル付けして配置し、脂質をさらに24時間乾燥させますが、72時間以下です。注: プロトコルは、24 ~ 72 時間後に再開できます。 2. 脂質ハイドレーション バスソシエーターに水を入れ、70°Cに加熱します。 水を混ぜるのを助けるために超音波処理をオンにします。注意: 水と超音波処理器は高温です。水と超音波処理器に触れないようにしてください。目の保護、保護ラボコート、および保護手袋を着用してください。 浴の超音波装置が70°Cに達したら、真空デシケーターから脂質バイアルを取り除きます。可能であれば、作業領域のライトを減らします。 10%プロピレングリコール、10%グリセロール、80%PBS(%v/v/v)の賦形液を調製し、その10 mLを脂質バイアルに加えます(ステップ1.1.1および「脂質式シート」を参照)。注:標準的な空気変位ピペットを使用する場合は、プロピレングリコールやグリセロールのような粘性溶媒を扱う際に注意してください。吸気し、ゆっくりとボリュームを突っ込み、残りの体積がピペットチップの底に達するのを待ちます。ゆっくりと動いてボリュームを移すときに、液体がピペットチップの外側にしがみつかないようにしてください。 脂質バイアルをキャップし、アルミニウムカバーを取り外し、超音波処理がオンになっている間、15分間浴超音波器でバイアルを穏やかに旋回させます。脂質バイアルの首が水の上にあることを確認してください。バイアルキャップがしっかりと閉じられているかどうかを確認する場合があります。 時折、水浴から脂質バイアルを取り除きます。ライトに短く保持して内容物が完全に溶解しているかどうかを確認します(図1E)。 脂質バイアルの内容物が均質化されていない場合は、浴超音波処理器から脂質バイアルを除去します。キャップを固定し、より積極的に旋回し、バスソニッケーターに戻します。 浴の超音波処理器から脂質バイアルを取り外し、バスの超音波処理器をオフにします。リピッドバイアルの外装をペーパータオルで乾かし、脂質バイアルのラベルを再設定します。 脂質バイアルをアルミホイルで覆い、室温で脂質バイアルを冷やして、暗く乾燥した部分で10分間冷却します。 アリコート脂質バイアル内容物:3mLホウケイ酸ガラス透明血清バイアル(7mm内口径、13mm外口径)における脂質溶液の約2mL。注:一部のプロトコルは、3 mLバイアル7で1.5 mLの脂質溶液を使用することがあります。 血清バイアルを凍結乾燥スタイルのグレークロロブチルゴムストッパー(7mm内口径、13mm外口径)でキャップし、ゴム栓を引き裂きアルミニウムシール(13mm外口径)とクリンパー(図1F)で固定します。 真空、脱気、および各血清バイアル4、5、7の脂質溶液を再加圧する(図2)。注: Gas Exchanger の組み立て方法と詳細については、「その他のプロトコルとデータ」を参照してください。 圧力バルブAとガスボンベバルブを含むすべてのバルブを閉じます(図2)。血清バイアルをマニホールド針に接続し、対応するマニホールドバルブを開き、真空バルブAと真空バルブBを開き、-90 kPa(-13 psi、-900 mbar)で真空を5分間真空にして大気を除去します。液体の掃除機をかけないでください(「その他のプロトコルとデータ」ステップS3からS3.1.5を参照)。注意: 真空ポンプは、誤って処理すると破裂する可能性があります。真空ポンプは、有機、酸性、塩基性の化学薬品と一緒に使用しないでください。 真空を維持したまま、(スイングするのを防ぐために)血清バイアルを保持し、脱ガスするためにペンまたはマーカーで素早くそれをタップします。泡が形成されず、バイアルに泡がなくなるまでタップし続けます。液体を真空にしないでください。必要に応じてタップを一時停止します。接続されているすべての血清バイアルについて繰り返します。すべての血清バイアルを脱気した後 、CLOSE 真空バルブAと真空バルブBと真空ポンプ をオフ にします(「その他のプロトコルとデータ」ステップS3.2からS3.2.3を参照)。 セラムバイアルを針に接続したまま、真空ポンプをオフにした状態で、ガスボンベバルブ1/16~1/8(全回転の約22.5~45°)を反時計回りに回して部分的に開き、Tハンドルバルブを開き、空気調整バルブを時計回りに3 psi(20.7 kPa)ゲージに ゆっくりと 回します。次に、圧力バルブAと圧力バルブBを開きます(「その他のプロトコルとデータ」ステップS3.3からS3.3.21を参照)。注意: デカフルオロブタンガスボンベは圧力を受けており、加熱すると爆発する可能性があります。熱や衝撃から離れておいてください。デカフルオロブタンガスは酸素変位や窒息を引き起こす可能性があります。適切な目の保護を着用し、ヒュームフードでハンドル。誤って取り扱うとガスボンベを真空にすることができ、急速な脱圧や爆発を引き起こす可能性があります。ガスボンベバルブを1/8回転以上開くと、エアレギュレータが破損する可能性があります。 30 s の加圧(ゲージはまだ3 psi(20.7 kPa)を読み取る必要があります)、すべてのマニホールドバルブを血清バイアルで閉じ、血清バイアルを切断し、針をシースし、ガスボンベバルブを 閉じます 。 エアレギュレータゲージ針が休息位置に入るまで、単一のマニホールドバルブを部分的に開けて、内蔵圧力を緩和します。その後、マニホールドバルブとTハンドルを含む、との間のすべてを閉じます。 血清バイアルにラベルを付け、4°Cと暗闇の中に保管してください。すべてのガス交換器バルブが閉じられ、その後真空ポンプがオフになっていることを確認します。注:血清は、この状態で4ヶ月まで安定している必要があります。このステップでは、プロトコルは、4ヶ月後に、後で、せいぜい再開することができます。 3. デカフルオロブタンバイアル 清潔で空の3mLホウケイ酸ガラス透明のセラムバイアル(7mm内口径、13mm外口径)を使用し、凍結乾燥スタイルのグレークロロブチルゴムストッパー(内口直径7mm、外口径13mm)でキャップし、ゴム栓を引き裂きアルミニウムシール(13mm外口径)とクリンパー4で固定します。 7,8. ステップ 2.9.1 に従って大気の空気を真空にします(「その他のプロトコルとデータ」ステップ S3.1 から S3.1.5 を参照)。 脱ガスをスキップし、手順2.9.3から2.9.5に従ってバイアルを再加圧します(「その他のプロトコルとデータ」ステップS3.3からS3.3.21を参照)。 デカフルオロブタンバイアルにラベルを付け、4°Cと暗闇の中に保管します。すべてのガス交換器バルブが閉じられ、その後真空ポンプがオフになっていることを確認します。注:液滴凝縮には、デカフルオロブタンガスで満たされた血清バイアルが必要になります。彼らは、この状態で4ヶ月まで安定している必要があります。このステップでは、プロトコルは、4ヶ月後に、後で、せいぜい再開することができます。 4. 液滴形成 血清バイアル(ステップ2.10から)の水分補給脂質溶液を冷蔵庫から取り出します。 デキャッパーを使用して、血清バイアルのアルミニウムシールを取り外し、脂質溶液を1.85mLのホウケイ酸ガラスサンプルバイアル(フェノールスクリューキャップ付き)に1mL移動し、脂質溶液を内壁に流し込みます。バブルを作成しないでください。 血清バイアルに残っている脂質溶液がある場合は、ステップ2.9〜2.10に従って脱ガスし、血清バイアルを再加圧して貯蔵します(「その他のプロトコルとデータ」ステップS3からS3.3.21を参照)。 1.85 mLサンプルバイアルを使用すると、ガス交換器を使用してサンプルバイアルヘッドスペースにデカフルオロブタンガスを穏やかに流します(特定のバルブ名については 図2 を参照)。 ガス交換器のすべてのバルブが適切に閉じられており、ポンプの電源が切れていることを確認します。注意: 間違って行った場合、急速な減圧および爆発を引き起こすガスボンベを真空にすることが可能です。 マニホールドバルブを1つ開き、マニホールドから対応する針を慎重に外します。注意:鋭利な物体は、接触/ピアスを避ける。 圧力バルブAと圧力バルブBを開き、ガスボンベバルブ1/16~1/8(全回転の約22.5~45°)を反時計回りに回し、Tハンドルバルブを部分的に開きます。注意: エアレギュレータに損傷を与える可能性がありますので、ガスボンベバルブを開けないでください。 脂質溶液でサンプルバイアルをアンキャップし、マニホールド針がバイアル内の液体空気界面の上になるように動かします。そこにバイアルを保持します。 エアレギュレータゲージの針が静止位置からわずかに移動し、パーフルオロカーボンガスがマニホールド針からそっと流れるまで、エアレギュレータバルブを時計回りにゆっくりと回します。パーフルオロカーボンガスを30秒のバイアルヘッドスペースに静かに流し込みます。バブルを作成しないでください。必要に応じて、エアレギュレータバルブを調整します。注: 液体空気界面は、デカフルオロブタンガスの流れによって若干動揺する必要があります。システムが開いているため、エアレギュレータゲージは圧力を正しく読み取ることができません。 30 sの後、慎重かつ迅速にバイアルをあまり動かさずにサンプルバイアルをキャップします。 ガスボンベバルブ(時計回り)、Tハンドルバルブ、エアレギュレータバルブ(反時計回り)、圧力バルブA、圧力バルブB、マニホールドバルブを閉じます。 慎重に針をシース。 サンプルバイアルにラベルを付け、時計回りに行くワックスフィルムで首を密封します(図3Aと3B)。注:図3B〜3Fは、30%のパイロ脂質製剤のみを示す。 サンプルバイアルは暗闇の中で、4°Cで少なくとも10分間、または24時間まで保管してください。注: このステップでは、プロトコルは後で、24時間再開することができます。 約100gのドライアイス(二酸化炭素)を断熱容器に入れ、別の断熱容器に規則的な氷を入れます。ステップ3で述べた調製されたデカフルオロブタン血清バイアル、2つの3.81 cm(1.5インチ)20ゲージ針、1mLプラスチックシリンジ(使用前にプランジャーを取り外す)、200mL容器、金属トング、および温度計(-20〜100°C)を取り出します。注:マイクロバブルを作るだけなら、イソプロパノール、ドライアイス、氷は必要ありません。 45 sの機械的攪拌機に脂質溶液とサンプルバイアルを入れ、攪拌する(図3C)。 機械的撹拌の後、サンプルバイアルを右サイドアップに立ち、光から遮光し、15分のカウントダウンを開始してバイアルを冷却し、マイクロバブル8,17をサイズ選択する。 15分のカウントダウンが10分(カウントダウンに残り5分)になったら、容器に約200mLのイソプロパノールを充填し、金属トングを使用したドライアイスで-20°Cに冷却します。注:目標温度は-15〜-17 °Cですが、イソプロパノールはマイクロバブルを扱いながらウォームアップします。注意: イソプロパノールは可燃性です。熱や火花から遠ざけてください。ドライアイスは皮膚損傷を引き起こす可能性があります。トングでハンドル。手袋、目の保護、保護ラボコートを着用してください。 マイクロバブルのサイズを15分間選択した後、サンプルバイアル内でサイズ選択されたパーティションを探します(図3D)。 サンプルバイアルを右サイドアップに保ち、サンプルバイアルを慎重にアンキャップし、1.5インチの20ゲージ針を1mLプラスチックシリンジに取り付けた底部の仕切り約0.7mLを引き出します。最上位パーティションがいずれも取り下げられないようにします。エアポケットを取り外すために注射器をフリックしないでください。 別の20ゲージの針をデカフルオロブタン血清バイアル(血清バイアルの上部付近に針を保持する)に挿入し、サイズ選択されたマイクロバブルで針/注射器を挿入します。 サイズ選択したマイクロバブルをゆっくりと転送します。バイアルを傾け、シリンジを角度にして、液体がデカフルオロブタン血清バイアルの内壁を滑り落ちるようにします。 サイズ選択されたマイクロバブル溶液をすべて転送したら、注射器で針を取り外しますが、通気針を入れ、負圧を緩和します(図3E)。 サイズ選択されたマイクロバブルのみを作る場合は、ここで停止します。通気針を上部と上部付近に保管します。バイアルは暗く室温に保ちます。 イソプロパノール浴に少量のドライアイスまたは室温イソプロパノールを加え、浴温度が-15〜-17°Cの間であることを確認します。 20ゲージの通気針をセラムバイアルの上部付近に挿入し、セラムバイアルをイソプロパノール浴に入れ、マイクロバブルレベルをイソプロパノールのレベル以下に保ち、バイアルネックを上に保ち、2分間血清バイアルを断続的に旋回してマイクロバブルを凝縮します。注:このステップは、Sheeranらによって行われた作業から変更されました6 イソプロパノールで血清バイアルを連続的に旋回させず、溶液を凍結させないでください。約5sのために旋回し、イソプロパノールから血清バイアルを持ち上げます。氷の核形成を確認し、イソプロパノールで旋回を再開します。氷の形成がある場合は、空気中の血清バイアルを放散するまで旋回する。 2分間の結露の後、イソプロパノール浴から血清バイアルを取り出し、通気針を取り除きます。注:マイクロバブルは、半透明の変化によって示されるように、液滴に凝縮されているはずです(図3E 対 図3F は30%パイロ脂質製剤用)。 血清バイアルを拭き、ラベルを付け、使用する準備ができるまで、暗い断熱容器の中の通常の氷の上に置きます。未開封の(無傷のアルミニウムシール)液滴は、溶けた氷が必要に応じて交換される限り、この状態で最大6時間安定している必要があります。 使用する準備ができたら、デキャッパーでアルミニウムシールを取り外します。使用していない間、氷の上や暗い状態で(バイアルを開いたとしても)液滴を保管してください。マイクロバブルを暗く室温に保ちます。 5. 形態学的・光学的特性評価 1%トリトンを準備する:5mLのトリトンX-100をPBS(1x、pH 7.4)の500mLに加え、均質な14まで磁気攪拌棒でかき混ぜる。注:トリトンX-100非常に粘性。標準的な空気変位ピペットを使用する場合は、取り扱い時に注意してください。吸気し、ゆっくりとボリュームを突っ込み、残りの体積がピペットの底に達するのを待ちます。ゆっくりと動いてボリュームを移すときに、液体がピペットチップの外側にしがみつかないようにしてください。 液滴を準備します(ステップ4)。マイクロバブルも特徴付けられる場合は、凝縮前にサイズ選択されたマイクロバブルの少量を収集します(ステップ4.9)。 0.2~6μmのコールターカウンター(CC)上のマイクロバブルまたは液滴のサイズを設定して、サイズ分布と濃度を得る(図4)。 0.2 μmのポアポリエーテルサルホン膜フィルターを通して濾過した10 mLのCC電解質をクリーンな20 mLキュベットに充填します。ベースラインを取得するために3つの実行でCCでそれを測定します。 同じCC電解質に、マイクロバブルまたは液滴サンプルを5 μL加えて、穏やかに混ぜます。注:サンプルの濃縮量に応じて、2~20 μLのサンプルを追加できます。 サンプルをCC(3回実行)で実行し、平均ベースラインを減算し、サイズ分布と濃度(mLあたりの数)を計算します。 UV-Vis分光法で液滴吸光度を測定する(図5)。注: 図5 は、30%のパイロ脂質製剤のみを示しています。 UV-Vis 分光光度計で、吸光度測定を 0.5 nm 単位で 800 nm ~ 300 nm の波長に設定し、ベースライン補正を有効にします。 PBSで満たされたきれいな1cmパス長キュベットを使用して、ベースライン測定を行う。分光器ビームパスと交差するほどの高さであることを確認します。 パイロリピッド液滴をPBSに希釈し(2μL~500μLの液滴を2000μLの希釈液に推奨)、ピペットで混ぜます。注: 渦を出さない か、またはアセンブリが破壊されます。 希釈液滴を洗浄されたキュベットに移し、吸光度を測定します。必要に応じて希釈を変更します。 ステップ 5.4.1 から 5.4.4 までを繰り返しますが、PBS の代わりに 1% トリトンを使用します。希釈後、測定前に30sの密閉可能/キャップバイアルと渦にサンプルを移します。 マイクロバブルまたは液滴の蛍光を測定する(図6)。注: 図6 は、30%のパイロ脂質製剤のみを示しています。 蛍光分光光度計では、励起波長を410nm、発光波長範囲を600~750nm(1nm単位)に設定します。 PBS希釈液の蛍光を測定し、蛍光分光光度計と互換性のあるキュベットを用いてベースラインを得る。 パイロ-脂質マイクロバブルまたは液滴をPBSに希釈し(0.5 μL~10 μLの液滴を2000 μLの希釈液に推奨)、ピペットで混ぜます。注: 渦を出さない か、またはアセンブリが破壊されます。 希釈したサンプルを洗浄されたベースラインキュベットに移し、蛍光を測定します。必要に応じて希釈を変更し、信号飽和を避けます。 ステップ 5.5.1 から 5.5.4 までを繰り返しますが、PBS の代わりに 1% トリトンを使用します。1%トリトンで希釈した後、希釈したサンプルを30sの密封可能/キャップされたバイアルと渦に移してから測定します。渦巻きから発生する気泡がレーザーパスの上にあることを確認するのに十分なボリュームを追加します。注:トリトンのサンプルの蛍光シグナルは、蛍光アンクチングのためにPBSよりもはるかに高くなります(図6)。 6. 気化イメージング 適切な大きさの水タンクに脱イオン水を充填し、24時間休んで水中のガスを大気と平衡させます。 液滴を準備し、使用するまで氷の上と暗闇の中に保ちます。 Pellowら.18 で説明したように2%寒天から流れファントムチューブを作り、ファントムを37°Cに加熱した水槽に沈下します。 PBSを37°Cに温め、ファントムを流します。 前臨床超音波システムと21 MHzリニアアレイトランスデューサ( 材料表を参照)を使用して、ビューをフローファントムに合わせ、Bモードイメージングに設定し、出力圧力を設定し、ビデオまたは画像をキャプチャして各圧力でベースラインを取得します。 液滴20μLを37°CPBSの50mLに希釈し、軽く混ぜます。溶液を30 mLのプラスチックシリンジに移し、溶液を寒天ファントムに押し込みます。 ステップ6.5と同じ位置合わせを保ち、気化が観察されるまで出力圧力を高める(ファントムの明るい斑点、 図7を参照)。注: 図7 は30%のパイロ-脂質液滴サンプルを示しています。この市販の21 MHzリニアアレイトランスデューサは、液滴のイメージングと気化の両方が可能です。