リンパ管内皮細胞のフローサイトのマウス肝臓の消化

肝臓のリンパ管と LECs の役割はよくわかっていません。リンパ管肝¹のポータル トライアド内にある病気の²の間に展開し、ほとんどは機能および肝臓内 LECs の表現型について理解されます。LECs³に主にあるマーカーの発見と恒常性と病気ニッチを異なる組織内でこれらの細胞の重要性は私達の理解の重要なギャップを埋めます。LECs は、T 細胞^4,5,6,7,8、と直接相互作用によってリンパ節、転移性腫瘍周辺の公差を維持する上で主要な役割を持っています。^{9,10,11,12,13}。 リンパ節で LECs は、渡り鳥樹状細胞^14,,1516との相互作用を介して防御免疫を促進できます。したがって、特定組織と相互作用が存在するかもしれない LECs に複数のロールがあります。ただし、非常に少しは LECs が組織の免疫細胞と対話する方法または LECs が異なる器官システムでどのように機能するかについて理解したがって、肝臓や他の臓器内のセルごとごとに LECs を評価 LECs プログラムの組織特異的免疫の進歩につながる可能性があります。肝臓で LECs に焦点を当てて文献の多くはマーカーと形態¹⁷の 1 つまたは 2 つ使用して LECs を可視化する顕微鏡を使用して、ほとんどはフローサイトメトリー、しかし 1 つの調査を使用してセルごとに LECs を具体的に評価に行われています。肝類洞内皮細胞 (LSECs) と LECs¹⁸の違いを評価しました。フローサイトメトリーによる肝臓のレック集団を分析できることで、LEC の表現型の詳細な研究通常恒常性や病気の時にことができます。

フローサイトメトリーによる LECs を評価するには、複数の表面マーカーが必要です。通常、LECs は、プロスペロー関連ホメオ ボックス 1 の式 (Prox-1)、リンパ管の内皮細胞のヒアルロン酸受容体 1 (LYVE1) または顕微鏡を用いた血管内皮細胞増殖因子受容体 3 (VEGFR3) によって視覚化されます。しかし、肝臓では、これらのマーカーの発現は LECs を制限されません。肝で肝開発、再生、および傷害¹⁹時近接 1 を広く表現し、LYVE1 と VEGFR3 は肝類洞内皮細胞¹⁸によって表されます。リンパ節で LECs は、分化 (CD) のクラスターとしてフローサイトメトリーを使用して識別されます CD45、CD31 +、ポドプラニン + (PDPN)¹⁶。しかし、このアプローチは CD45-CD31 陽性細胞は、血管内皮細胞をキャプチャし、肝臓の血管内皮細胞の優勢な人口が LSECs ので、肝臓で LECs を分離するも最小限。したがって、他のマーカーは、豊富な LSEC 人口からまれな LEC の人口を区別するために必要です。CD16/32 (成熟した LSECs¹⁸によって表される)、CD146 (一般的な血管内皮細胞マーカーは主に肝類洞内皮細胞²⁰リンパでない式には少し肝洞様毛細血管内で表現内皮細胞²¹) 候補マーカーします。

したがって、我々 は分離とフローサイトメトリー用上記のマーカー、CD45、CD31、CD146、CD16/32、および PDPN を利用した肝臓内 LECs を可視化法を最適化されています。IV コラゲナーゼの使用、DNase 1 と単一細胞懸濁液に肝臓消化機械的分離について述べる。非実質細胞 (NPC) と細胞残屑を除去するために分離の iodixanol の密度勾配の使用についても述べる。最後に、複数のマーカーを使用して、我々 は優勢なマーカーとしての PDPN と肝臓から LECs を識別するために最適な流れ cytometry ゲーティング戦略を決定します。