Характеристика и изоляция первичной микроглии мыши по плотности градиентного центрифугирования

Ущерб, приобретенные в перинатальный период от воспаления, гипоксическая ишемия и кровотечение может иметь массив долгосрочных осложнений. Привлечь воспаления и ишемии с последовавшей смерти нейронов и аксональной¹предположил комплекс патофизиологии перинатальной черепно-мозговой травмы. Врожденный иммунный ответ играет важную роль в каскад событий, приведших к травмы².

Микроглии, резидентов иммунные клетки в пределах центральной нервной системы (ЦНС), являются первыми реагируют на травмы³. Микроглии являются типы пластиковых клеток с способность быть защитные или токсичными, зависит от окружающей среды⁴. Они участвуют в хемотаксис, фагоцитоз, презентации антигена и производство цитокинов и реактивнооксигенных видов^4,5. Стареющей микроглии постоянно обследования окружающей среды и активируются присутствие иностранных или вредные вещества,⁴. Активация приводит к про воспалительной реакции, критические в ЦНС защиты⁴. Эти М1 «про воспалительных» фенотип микроглии главным образом участвуют в презентации антигена и гибель патогенов⁴. Несмотря на решающую роль воспалительной реакции в нейропротекции неконтролируемое или длительное воспаление может быть вредным и привести к повреждения нейронов⁴. Однако при воздействии определенных экологических раздражителей, микроглии могут exhibit противовоспалительные фенотип. Эти про репаративной микроглии м2 имеют решающую роль в заживление ран и ремонт⁶, освобождение ряда цитокинов и других растворимых медиаторов, что помощью воспаления, усиливают фагоцитоз и поощрять ремонт^{4, 7}. роли микроглии разнообразны и включают вождения Олигодендроциты дифференциация во время ре миелинизации⁸, защищая нейроны во время истощения кислорода и глюкозы в ход модели⁹ и поощрение neurite нарост в травмы спинного мозга моделей¹⁰.

Изучение этих глиальных клеток представляет собой важный аспект в понимании и манипулирования ответ на neuroinflammation. Описывается протокол позволяет для дальнейшего расследования терапевтический потенциал микроглии модуляции в neuroinflammatory расстройств.

Модуляция микроглии активации к роли нейропротекторной наблюдается в диапазоне условий^11,12,13. Таким образом улучшение нынешнего понимания и дальнейшего изучения модуляции микроглии активации является критическим, требующих использования различных моделей, включая в пробирке и в естественных условиях. В vitro исследования представляют собой важный инструмент из-за их большей эффективности, Нижняя стоимость и возможность исследовать популяции изолированных клеток.

Существует целый ряд протоколов, описанные в литературе для изоляции микроглии из мышиных мозги, вызов эффективно производить высокий урожай образца с хорошей жизнеспособность и высокой чистоты. Часто используемые методы изоляции первичных Микроглии являются магнитной сепарации и длительной тряски смешанные глиальных культур. Через личный опыт было установлено, что существует высокая степень сотовой мусора, который препятствовали столбце магнитные. Таким образом был использован следующий протокол, который включает в себя шаг градиентного центрифугирования Начальная плотность, следуют CD11b магнитной сепарации. Производить очень чистый образец в достаточном количестве был оптимизирован протокол, описанные ниже. Это выгодно из-за его высокой чистоты и короткий период времени — одно можно выполнения анализов в течение 2 дней без культуры для 2-3 недели. Этот протокол потенциально может быть адаптирована для изоляции первичных мышиных астроциты.