אפיון ובידוד של העכבר מיקרוגלייה העיקרי על ידי צנטריפוגה הדרגתיות צפיפות

נזק רכשה במהלך תקופת הלידה דלקת, מחוסר חמצן-ischaemia, דימום יכול להיות מערך של sequelae לטווח ארוך. הפתופיזיולוגיה המורכבת של פגיעה מוחית הלידה הוא משוער לערב דלקת ו איסכמיה עם מוות עצביים עצב שהתפתח¹. התגובה החיסונית מולדת ממלא תפקיד חשוב בהמפל של האירועים שהובילו פגיעה².

מיקרוגלייה, תושב תאים חיסוניים בתוך מערכת העצבים המרכזית (CNS), הם המגיבים הראשונים פציעה³. מיקרוגלייה הם סוגי תאים פלסטיק עם היכולת להיות תלויי מגן או רעיל, על הסביבה⁴. הם מעורבים כימוטקסיס, phagocytosis, מצגת אנטיגן וייצור של ציטוקינים ו^4,של מינים חמצן תגובתי⁵. מיקרוגלייה senescent כל הזמן סקר את הסביבה, מופעלים על ידי הנוכחות של חומר זר או מזיקים⁴. הפעלת מוביל לתגובה הפרו דלקתיים, קריטי ב CNS הגנה⁴. מיקרוגלייה פנוטיפ “פרו-דלקתיים” אלה M1 מעורבים בעיקר אנטיגן מצגת ומוות של פתוגנים⁴. למרות תפקיד מכריע התגובה דלקתית neuroprotection, דלקת בלתי מבוקרת או ממושך יכול להיות מזיקים להוביל נזקים עצביים⁴. עם זאת, כאשר הם נחשפים לגירויים סביבתיים מסוימים, מיקרוגלייה יכול התערוכה של פנוטיפ אנטי דלקתיות. מיקרוגלייה M2 pro-תיקוני אלה יש תפקיד קריטי פצע ריפוי ותיקון⁶, שחרור מגוון של ציטוקינים ותיקון עוד מגשרים מסיסים downregulate דלקת, להגדיל phagocytosis ולקדם^{4, 7}. התפקידים של מיקרוגלייה הינם מגוונים וכוללים בידול אוליגודנדרוציטים נהיגה במהלך re-myelination⁸, הגנה על נוירונים במהלך דלדול חמצן, גלוקוז מודלים קו⁹ וקידום תוצר neurite ב פגיעה בחוט השדרה מודלים¹⁰.

המחקר של אלה גלייה מייצג היבט חשוב להבנה, מניפולציה התגובה neuroinflammation. הפרוטוקול המתואר מאפשר חקירה מתמשכת לתוך הפוטנציאל הטיפולי של אפנון מיקרוגלייה בהפרעות neuroinflammatory.

מודולציה של הפעלת microglial לקראת תפקיד neuroprotective נצפתה במגוון של מצבים^11,12,13. לכן, שיפור ההבנה הנוכחית נוספת ללמוד אפנון של הפעלת microglial הוא קריטי, הדרישה לשימוש של מודלים שונים כולל חוץ גופית בתוך ויוו. מחקרים במבחנה מייצגים כלי חשוב בשל שלהם גדול יותר, נמוך יותר עלות ויעילות היכולת לחקור אוכלוסיה תא מבודד.

ישנם מגוון של פרוטוקולים המתוארים בספרות על בידודו של מיקרוגלייה מן המוח מאתר, האתגר לייצר ביעילות מדגם תשואה גבוהה עם יכולת הקיום טוב, טוהר גבוהה. השיטות הנפוצות של בידוד של ראשי מיקרוגלייה הן על ידי הפרדה מגנטית ורעדתי ממושך של תרבויות גליה מעורבת. מניסיון אישי, התברר שהיה שם מידה רבה של פסולת הסלולר אשר נחסמת העמודה מגנטי. כך, הפרוטוקול הבא היה מנוצל, אשר משלבת צעד צנטריפוגה הדרגתיות צפיפות הראשוני ולאחריו הפרדה מגנטית CD11b. הפרוטוקול המתואר להלן מוטבה כדי לייצר מדגם הטהור מאד בכמות מספקת. . זה יתרון בשל טוהר גבוהה שלה ואת תקופת זמן קצר – אחד יכול לבצע מבחני תוך יומיים ללא צורך תרבות במשך 2-3 שבועות. באופן פוטנציאלי יכול להיות מותאם פרוטוקול זה בידודו של ראשי האסטרוציטים מאתר.