Karakterisering en isolatie van de primaire Microglia muis door dichtheid kleurovergang centrifugeren

Schade verworven in de perinatale periode van ontsteking, hypoxische-ischemie en bloedingen kan een matrix van lange termijn gevolgen hebben. De complexe pathofysiologie van perinatale hersenletsel is theorie ontsteking en ischemie met daaropvolgende neuronale en axonale dood¹te betrekken. De aangeboren immuunrespons speelt een belangrijke rol in de opeenvolging van gebeurtenissen die leiden tot letsel².

Microglia, de resident immuuncellen in het centrale zenuwstelsel (CNS), zijn de eerste responders aan schade³. Microglia zijn kunststof celtypes met het vermogen om zowel beschermende of giftig, afhankelijk van de milieu-⁴. Ze zijn betrokken bij chemotaxis, fagocytose, antigeen presentatie en productie van cytokines en reactieve zuurstof soorten^4,5. Verouderend microglia voortdurend onderzoek van het milieu en worden geactiveerd door de aanwezigheid van een buitenlandse of schadelijke stof⁴. Activering leidt tot een pro-inflammatoire respons, kritische in CNS bescherming⁴. Deze M1 “pro-inflammatoire” fenotype microglia zijn vooral betrokken bij antigeen presentatie en dood van ziekteverwekkers⁴. Ondanks de cruciale rol van de inflammatoire respons in neuroprotectie kunnen ongecontroleerde of langdurige ontsteking schadelijke en leiden tot neuronale schade⁴. Echter wanneer blootgesteld aan bepaalde milieu stimuli, kan microglia vertonen een anti-inflammatoire fenotype. Deze pro-herstellend M2 microglia hebben een cruciale rol in de wondgenezing en het herstel van⁶, het vrijgeven van een reeks van cytokines en andere oplosbare bemiddelaars dat downregulate ontsteking, verhogen van fagocytose en bevorderen herstellen^{4, 7}. de rol van microglia zijn divers en omvatten drijvende Oligodendrocyt differentiatie tijdens re-myelinisering⁸, bescherming van neuronen tijdens uitputting van zuurstof en glucose in lijn modellen⁹ en bevordering van neurite uitgroei in dwarslaesie modellen¹⁰.

De studie van deze gliale cellen vertegenwoordigt een belangrijk aspect in het begrip en het manipuleren van het antwoord op neuroinflammation. Het beschreven protocol voorziet in verdere onderzoek naar de therapeutische mogelijkheden van microglia modulatie in neuroinflammatoire aandoeningen.

De modulering van de activering van de microglial naar de rol van een neuroprotectieve geconstateerd in een aantal voorwaarden^11,12,13. Dus, verbetering van de huidige kennis en verder studeren modulatie van de activering van het microglial is essentieel, waarbij het gebruik van diverse modellen, met inbegrip van zowel in vitro als in vivo. In vitro studies zijn een belangrijk instrument als gevolg van hun grotere efficiëntie, lagere kosten en de mogelijkheid te onderzoeken van een geïsoleerde-celpopulatie.

Er zijn een aantal protocollen die zijn beschreven in de literatuur voor de isolatie van microglia vanuit lymfkliertest brains, de uitdaging om een steekproef van hoge opbrengst efficiënt te produceren met goede levensvatbaarheid en hoge zuiverheid. Veelgebruikte methoden van isolatie van primaire microglia zijn door magnetische scheiding en langdurig schudden van gemengde gliale culturen. Door persoonlijke ervaring bleek dat er een hoge mate van cellulaire puin die belemmerd de magnetische kolom. Zo werd het volgende protocol gebruikt, waarin een oorspronkelijke dichtheid kleurovergang centrifugeren stap gevolgd door magnetische scheiding van CD11b. Het protocol die hieronder beschreven is geoptimaliseerd voor het produceren van zeer zuivere eenmonstervan in voldoende hoeveelheid. Het is gunstig als gevolg van de hoge zuiverheid en de korte periode — een testen binnen 2 dagen kunt uitvoeren zonder cultuur voor 2-3 weken. Dit protocol kan mogelijk worden aangepast voor de isolatie van primaire lymfkliertest astrocyten.