3 ヒストンのリジン 79 ジメチル化マークのクロマチン免疫沈降に続いて神経前駆細胞の分離と培養

脳の感覚, モータ, と認知機能が非常に複雑で物理的な環境の変化に影響を受けやすいです。脳は、深くつながっています 3 つの一般的な部分、後肢-、半ばと前脳, で構成されています。前脳, 内終脳は背終 (DT) と腹側終 (VT) に分けることができます。マウスの DT は、「インサイド アウト」方法¹で E11.5 と E18.5 間形作られる六つの皮質層で構成されています。VT には、開発後大脳基底核^2,3を形成する神経節隆起が含まれています。いくつかの細胞の種類で分類できます哺乳類の中枢神経系神経細胞やアストロ サイト、オリゴデンドロ サイト⁴など⁵時間空間的方法を開発します。まず、神経前駆細胞 (Npc) はニューロン、介在ニューロン VT と投射ニューロンの種類に、DT ではグリア細胞 (例えば、アストロ サイト⁶) に上昇を与えます。皮質過程を最も表面的な層 (層)、最初に形成、カハール ・ レチウス細胞を含みます。Npc を生成 E12.5 と E14.5 の間より深い神経層 (VI, V) 中を生じさせる上層 (第四) ニューロン^7,814.5 16.5、前駆細胞の間。軸索の身元は、異なるモルフォゲン誘起の時間空間的転写プログラムおよびまたエピジェネティック プログラム²に指定します。

モーターの調整に関与しているが、小脳は菱脳にありマウス⁹で E10 と約 P20 の間成長します。小脳皮質と小脳核¹⁰が含まれています。成人の小脳皮質は 3 層、最も外側の分子層、プルキンエ細胞層、顆粒ニューロンの¹⁰を含む最も内側の顆粒層から成っています。小脳顆粒細胞は最小のニューロンで、脊椎動物の脳¹¹すべての神経細胞の約 80% を表しています。彼らは外部の胚のゾーンに位置する前駆体から開発し、彼らの先¹²プルキンエ細胞層を移行します。終脳、小脳の開発はいくつかの重要なモルフォゲンによって調整される、ように時間と空間に依存した特定の機能を持っているし、開始は転写プログラム¹⁰に定義されています。

大脳皮質と小脳の層の開発は、特定のモルフォゲンの転写式で、したがって、DNA のクロマチンの状態によって制御されます。簡易ビューでクロマチンの状態を転写活性状態としてユークロマチンと転写活性サイレント領域として異質染色質に分割できます。クロマチンの基本単位としてヌクレオソームには、各コアのヒストン H2A、H2B、H3、H4、147 の塩基対の DNA¹³に囲まれた 2 つのコピーが含まれています。ヒストンは、メチル化、アセチル化、リン酸化、ユビキチン化、sumo 化、ADP リボシル化、脱アミノ化、およびプロリン異性化^14,15によって高いファーストクリーニング変更します。ヒストンのリジンのメチル化は転写、複製、組み換え¹⁶、DNA 損傷応答¹⁷、およびゲノムインプリンティング¹⁸制御する最も安定したヒストン修飾と見なされます。リシンはモノラル、ディ、またはトリ メチル¹⁹アクセス可能なヒストンの尾にだけでなく、ヒストン²⁰の球状ドメイン内で表示できます。H3K4 H3K36 で特定のメチル化は、主ユークロマチン、H3K9、H3K27、または H4K20 で特定のメチル化は主にヘテロクロマチン領域、すべての残基がヒストンの尾^14,内にある^19,21。H3K79 のメチル化はヒストンの球状ドメイン内にあるし、転写活性、発現不活性ゲノム領域²²とも関連付けられています。それは、酵母や子牛の胸腺、鶏、人間²³で観察されているので変更は保存されました。H3K79 モノ, ジおよびトリメチル (H3K79me1、me2、me3) は、ヒストンのメチル化酵素 DOT1L^24,25と²⁶核設定ドメインを含むタンパク質 2 (Nsd2) によって触媒されます。DOT1L は、増殖、DNA 修復、²⁷の reprograming 携帯電話で関与しています。マウスでDot1lの損失は、発達段階 E10.5^28,29周り出生前の死に します。心臓の発達過程および myocardiocyte の分化は、DOT1L は遺伝子発現の規則³⁰に不可欠です。中枢神経系における DOT1L 関数は、神経管開発³¹で関与する可能性があります、それはTbr1の抑制に関与する-脳開発³²中、式小胞体ストレスによる機能可能性があります応答遺伝子³³。コンテキスト依存のアクティブ化または中枢神経系の開発のような体内状況に特に H3K79me の抑制作用は、日付には部分的に³²を理解専用です。H3K79 のメチル化はヒストン 3 の球状ドメインにあるので、柔軟なヒストンの尾²³での変更と比較してアクセスしにくい立体です。H3K79 メチル化の機能を理解し、その場所とゲノム環境を決定する信頼性と再現性の高い分析法が必要です。QPCR や時点の異なるシーケンスを介して H3K79 のメチル化を分析する、異なる神経前駆細胞 (皮質のクリック単価) と小脳の CGNPs、DOT1L 阻害剤治療、チップ メソッドの分離手法を提示するこの方法で大脳皮質と小脳の開発中にポイント。プロトコルとその可能性の概要については、図 1を参照してください。