分離とシロイヌナズナ由来のミトコンドリアの呼吸測定

植物ミトコンドリア研究の歴史は、100 年¹以上さかのぼります。無傷ミトコンドリアが 1950 年代初頭に隔離された最初差動遠心分離を使用します。1980 年代におけるコロイドの密度勾配の出現は、浸透圧調節を受けることがなく精製するミトコンドリアを許可しました。グラデーション精製ミトコンドリアは質量分析法の感度のためのほとんどの目的に適しているも比較的軽微な汚染物質検出することができます、不適切なミトコンドリアの場所²を割り当てることができます。プラスチド局在型の両方を削除フリーフロー電気泳動することができますの使用とペルオキシソーム汚染³、無料が、フローの電気泳動は専門性の高い技術と研究の大半には必要ありません。さらに、そのデュアルまたは複数のターゲット蛋白質の思い出したする必要がある蛋白質の場所を決定するときにセルに発生します。葉緑体/プラスチドとミトコンドリアの⁴、およびミトコンドリア標的蛋白質の数の以上 100 デュアル ターゲットタンパク質を説明し、ペルオキシソームでは⁵が知られています。さらに、特定の刺激、酸化ストレスなどの下で蛋白質の再配置は、細胞生物学⁶新興テーマです。このように、蛋白質の位置を学び、生物学の文脈で検討する必要が、さまざまなアプローチ、決定および場所²を確認します。

ミトコンドリア、通常の均質化によって植物組織から分離されて、バランスがミトコンドリアを解放する細胞壁を壊して開けるとミトコンドリアを損傷されていない間必要です。伝統的に、ジャガイモとカリフラワー、均質化は、活動を維持するためにさまざまなコンポーネントのバッファーで抽出液を作る家庭用ミキサー/ジューサー装置を使用します。エンドウ葉からミトコンドリアの分離 (稚苗 (~ 10 日古い) を使用してミトコンドリアの分離のための普及した材料は、葉材が柔らかくて、細胞を溶解するミキサーを利用しています。シロイヌナズナT-DNA 挿入ノック アウトの行の可用性と機能研究を実施するミトコンドリアを浄化することができる必要がある葉、根、花からミトコンドリアの分離法の開発組織。全体的に他の植物の開発方法を最適化するために必要な材料の研削役得で、よく⁷に働いた。シロイヌナズナのこれはさまざまな方法 (下記参照) で達成することができます、組織の種類 (撮影対ルート) によって異なります。さまざまな器官からミトコンドリアの密度として連続的な勾配の使用を最適化することも、または発達段階を意味する彼らは別様に移行することができます。したがって、最大分離のためグラデーションの密度は、洗練された最高の分離を達成するためにことを確認することができます。

一度精製したタンパク質、tRNA の吸収実験、酵素活性測定法、呼吸鎖測定および西部のしみの分析を含む研究のさまざまなミトコンドリアを使用ことができます。ミトコン ドリアは、蛋白質量の質量分析にも使用できます。複数の反応 (MRM) 分析を監視可能の定量化タンパク質を定義しますが、重要な分析法の開発を必要とする対象となります。これに対し、ジメチルまたは他同位体ラベル⁸による定量化は、生物学的知見を明らかにする使用することができます全体のプロテオームの間での違いを識別するに発見アプローチを提供します。