O pulmão bovino em Investigação Biomédica: visualmente guiada Broncoscopia, intrabrônquico Inoculação e<em> In Vivo</em> Técnicas de Amostragem
Summary
Este artigo descreve técnicas de broncoscopia no pulmão bovino em condições experimentais, ou seja, a inoculação broncoscopicamente guiada, lavado bronco-alveolar, escovado brônquico e biópsia pulmonar transbrônquica.
Abstract
Há uma busca permanente de modelos animais alternativos na pesquisa da medicina respiratória. Dependendo do objetivo da pesquisa, os grandes animais como modelos de doença pulmonar muitas vezes se assemelham a situação do pulmão humano muito melhor do que os ratos fazem. Trabalhando com grandes animais também oferece a oportunidade de saborear o mesmo animal várias vezes ao longo de um determinado curso de tempo, o que permite que os estudos a longo prazo, sem sacrificar os animais.
O objetivo foi o de estabelecer métodos in vivo de amostragem para o uso em um modelo de bovinos de uma infecção Chlamydia psittaci respiratório. A amostragem deve ser efectuada em vários pontos de tempo em cada animal durante o estudo, e as amostras devem ser adequados para estudar a resposta do hospedeiro, bem como o agente patogénico, em condições experimentais.
A broncoscopia é uma valiosa ferramenta de diagnóstico em medicina humana e veterinária. É um procedimento seguro e minimamente invasivo. Este article descreve a inoculação intrabrônquico de bezerros, bem como métodos de amostragem para o trato respiratório inferior. Videoendoscópica, inoculação intrabrônquico leva a achados clínicos e patológicos muito consistentes em todos os animais inoculados e é, portanto, adequado para uso em modelos de doença pulmonar infecciosa. Os métodos de amostragem descritos são lavado bronco-alveolar, escovado brônquico e biópsia pulmonar transbrônquica. Todos estes são valiosas ferramentas de diagnóstico em medicina humana e poderiam ser adaptados para fins experimentais para bezerros com idade de 6-8 semanas. As amostras obtidas foram adequados para a detecção de agentes patogénicos e caracterização da gravidade da inflamação do pulmão no hospedeiro.
Introduction
Os Valores de grandes modelos animais na investigação biomédica
Na pesquisa biomédica interdisciplinar moderno, modelos animais ainda são indispensáveis para elucidar interações complexas – relacionado à saúde ou um estado da doença – dentro de organismos de mamíferos. Apesar de 17 prêmios Nobel a ser concedido a cientistas que estudaram o gado, cavalos, ovelhas, ou aves como modelos para a investigação biomédica 1, hoje em dia a grande maioria das experiências com animais sejam realizados com roedores, enquanto que menos de 1% dos estudos estão a trabalhar com os animais domésticos ou pecuária.
Pequenos animais oferecem muitas vantagens práticas (ou seja, de baixo custo, maleabilidade genética, alta produtividade, disponibilidade de numerosos genética e ferramentas imunológicas e kits), e modelos murinos geneticamente modificados são geralmente aceitos para realizar estudos sobre os mecanismos descobrindo caminhos moleculares específicos. Na pesquisa biomédica de sistemas complexos, tele relevância biológica e utilidade clínica dos modelos de ratos está se tornando cada vez mais questionável. Eles poderiam ser enganosa e assumir o risco de excessiva simplificação da complexidade biológica 2-9.
Devido às peculiaridades inter-espécies, há espécies animais individuais irá espelhar completamente a situação humana, e a utilização de mais de um modelo parece ser benéfica em uma abordagem de pesquisa interdisciplinar biomédica. No contexto da medicina translacional, animais de grande porte oferecem a oportunidade de servir como modelos comparativos fornecendo resultados com alta relevância biológica de dupla utilização para a saúde humana e animal 1. Notavelmente, o genoma humano está mais intimamente se assemelhavam com o genoma bovino de pelo genoma de roedores de laboratório. Também foi recentemente confirmado que, em comparação com outros taxa, o genoma dos ratos é muito mais rearranjado 10-12.
Em um projeto de estudo complexo, o uso de animais oferece a unique oportunidade de, estudos intra-individuais de longa duração por recolha repetida de uma variedade de amostras in vivo a partir de um e de o mesmo individuum sem sacrificar o animal. Portanto, as alterações funcionais, inflamatórias e morfológicas podem ser monitorizados para o mesmo indivíduo ao longo de um certo período de tempo 13.
O pulmão bovino como um modelo respiratório adequado
Devido ao elevado número de diferenças significativas na anatomia do pulmão, fisiologia respiratória, e imunologia pulmonar, os ratos não se reproduzem muitos aspectos fisiopatológicos importantes da doença pulmonar humana. Isto deve ser tomado em conta quando se utiliza como modelos animais de doença respiratória 2,9,14-16. Embora peculiaridades da anatomia e estrutura que existem para cada pulmão de mamíferos, características funcionais (ou seja, os volumes pulmonares, fluxos de ar e mecânica respiratória) são mais comparáveis entre seres humanos adultos e bezerros devido ao peso corporal semelhantes(50-100 kg).
As características do pulmão bovino específicos das espécies, estão resumidos como se segue: o pulmão esquerdo consiste em dois lóbulos (cranialis LoBus, que é dividido em dois segmentos, e lobus caudalis), enquanto o pulmão direito consiste de quatro lóbulos (lobus cranial, lobus medius, lobus caudalis e lobus accessorius). Ao contrário da anatomia do pulmão da maioria dos outros mamíferos, os brônquios dos ramos lobo cranial direito diretamente da lateral direita da traquéia. No que diz respeito ao subgross anatomia, o pulmão de bovino apresenta um elevado grau de lobulação e uma elevada percentagem de tecido intersticial 17,18 conduzindo a um nível relativamente baixo da complacência pulmonar específica e uma resistência do tecido pulmonar superior 19. Portanto, a actividade de respiração necessário é bastante elevado em comparação com outras espécies de 20,21. O elevado grau de lobulação conduz a uma forte independência dos segmentos. Assim, infprocessos lammatory são limitados por septos do tecido conjuntivo, e segmentos doentes e saudáveis, muitas vezes se encontram dentro do mesmo lobo. Devido à falta de vias colaterais, o pulmão de bovino é particularmente adequada para espelhar disfunções pulmonares obstrutivas 13. Em relação à vasculatura do pulmão de bovino, as pequenas artérias pulmonares mostram camadas de músculo liso muito proeminentes. Portanto, o vitelo pode também servir como um modelo animal bem estabelecido para a hipertensão pulmonar ou remodelação vascular 22-24.
Com relação às infecções respiratórias, doenças que ocorrem naturalmente existem em gado que compartilham muitas semelhanças com a doença comparável no homem. Exemplos típicos são a tuberculose bovina 25, o vírus sincicial respiratório (VSR) infecções em bezerros 26-28, ou infecções de clamídia naturalmente adquiridas 29. Assim, as grandes modelos animais que se assemelham a situação no hospedeiro natural. Portanto, eles são mais useful para o estudo de interações patógeno-hospedeiro e complexa fisiopatologia da doença correspondente em seres humanos 30,31.
Como um modelo biologicamente relevante de infecção Chlamydia psittaci respiratória, os bezerros foram escolhidos por bovinos representam hospedeiros naturais para este patógeno 32-35. As informações obtidas a partir deste modelo, com relação a patogênese da doença ou possíveis vias de transmissão entre animais e seres humanos, vai ajudar a ampliar o nosso conhecimento com impacto tanto para o gado eo homem. O modelo também pode ajudar a verificar se as opções terapêuticas alternativas geralmente aceites e para a eliminação de C. pulmonar infecções psittaci, que é, mais uma vez, de interesse em medicina veterinária e humana.
Técnicas aplicadas e amostras obtidas a partir do Sistema Respiratório Bovino
Este artigo descreve e ilustra as técnicas e métodos de diagnóstico applicable para o pulmão de bovino e utilizados no nosso modelo para avaliar ambos os efeitos do patogénio no pulmão de mamífero e a eficácia da intervenção terapêutica.
A broncoscopia foi realizada na medicina humana desde os anos 1960 e é considerado um procedimento seguro 36. Em vitelas, broncoscopia experimental foi descrita em 1968, pela primeira vez 37. A aplicação intrabrônquico de patógenos foi sugerido por Potgieter et al. Como um método confiável para a produção de doença do trato respiratório inferior em bezerros 38 e é agora um método generalizado na pesquisa bovina 34,39,40. Inoculação intrabronquial de uma quantidade definida do patógeno sob controlo videoendoscópico permite a colocação selectiva do agente infeccioso no pulmão. Isto leva a achados clínicos e patológicos consistentes em todos os animais 34 e permite amostragem orientada de regiões pulmonares que se espera que sejam alteradas devido à exposição de patógenos.
<pclasse = "jove_content"> broncoalveolar fluido de lavagem (LBA), é um indicador bem descrita para a presença e gravidade de inflamação pulmonar. A lavagem broncoalveolar (BAL) é um procedimento padrão na medicina humana, para o diagnóstico de uma variedade de doenças respiratórias 41. Em bovinos vivos, BAL foi introduzido por Wilkie e Markham no final dos anos setenta do século passado 42. Considerou-se uma técnica segura e reprodutível para estudar o tracto respiratório inferior de gado. Devido à falta de dados suficientes sobre os parâmetros LBA em animais saudáveis, em 1988 Pringle et al. Realizada BAL em bezerros saudáveis com um broncoscópio de fibra óptica flexível. Os autores também apontou a necessidade de padronizar os protocolos de BAL em condições experimentais para a aquisição de resultados comparáveis 43. BAL é ainda usado como um método in vivo de amostragem em bezerros 44-46.Escovação brônquica é comumente usado em medicina humana como umferramenta de diagnóstico para provar lesões neoplásicas ou para análise microbiológica 36. Para os fins da pesquisa, as culturas de células primárias de células epiteliais colhidas por escovagem citológica pode ser obtido 47. Em gado, o uso de escovagens brônquicas para análise microbiológica foi descrito para caracterizar o ambiente microbiano do pulmão 43.
A biópsia pulmonar transbrônquica fornece amostras de tecido do pulmão e é uma valiosa ferramenta de diagnóstico para doenças pulmonares difusas em seres humanos. Pneumotórax iatrogênica e hemorragia relacionada ao procedimento são as complicações associadas com esta técnica. A sua incidência é relatado como sendo inferior a um por cento em pacientes humanos 48. Biopsia do pulmão transbrônquica não é um método comum para a utilização em bovinos, devido ao elevado custo do equipamento necessário e o tempo necessário para obter biópsias. Em vez disso, biópsias pulmonares transcutânea são mais convenientes em condições de campo 49-51.
Protocol
Representative Results
Discussion
Um método de broncoscopia de inoculação foi desenvolvida e vários métodos de amostragem broncoscopia foram adaptados para serem utilizados em animais de grande porte, em condições experimentais. As técnicas descritas são fáceis de aprender, mesmo para examinadores com pouca experiência em endoscopia. O processo de broncoscopia é minimamente invasiva e sem efeitos adversos associados com os métodos da inoculação, bem como os métodos de amostragem descritos (BAL, biopsia pulmonar transbrônquica, escovagem brônquica), nunca foram observados em qualquer um dos animais. As complicações associadas com biópsias pulmonar transbrônquica em humanos estão sangrando e pneumotórax 48, nenhum deles foram observadas nos bezerros que foram submetidos a esse procedimento. A biópsia pulmonar transbrônquica é mais demorado e exige mais equipamentos do que o método transcutâneo, mas é menos invasivo e não assumir o risco de infecção da ferida.
O método visualmente controlada, endoscópico de inoculaçãoião permite a deposição de uma quantidade definida de agente patogénico em sítios específicos do pulmão. Assim, resulta em achados clínicos e patológicos muito consistentes em todos os animais inoculados 32-34. No entanto, isso não se assemelha a todas as características de infecção natural em bovinos. Em um modelo de um C. respiratória infecção psittaci, a técnica descrita de inoculação levou a lesões pulmonares associadas aos locais de colocação patógeno 34, que, em infecções adquiridas naturalmente bezerros geralmente se desenvolvem pneumonia dos lobos apicais. Este facto tem que ser levado em conta ao interpretar a relevância dos resultados experimentais no contexto de infecções pulmonares naturais adquiridos em bovinos.
Videoendoscópica BAL permite a amostragem de uma área definida do pulmão. Para fins experimentais, esta é uma vantagem em comparação com a utilização de um cateter nasal sob condições cegas. Devido à anatomia do pulmão de bovino, o cateter inserido cegamente seria impulsoed para o lóbulo direito do diafragma, na maioria dos casos, 53,54 e o examinador não tem nenhuma influência sobre a área do pulmão que está lavados. Outra vantagem da BAL endoscópica em bezerros anestesiados em decúbito lateral é a elevada taxa de recuperação média de fluido instilado de mais do que 80%. A comparação com outros estudos revelam que, em pé, bezerros sedados, uma recuperação de 133,3 ± 1,6 ml 46 e 127,13 ± 3,53 ml 45 após a instilação de 240 ml de líquido para o lobo caudal é relatado. Em vitelas sedados em decúbito esternal 51% do fluido instilado pode ser recuperado a partir do lobo cranial e 62% a partir do lobo caudal 43. Isto significa que aproximadamente a metade do líquido instilado poderia ser recuperado em posição vertical da panturrilha. Dependendo da quantidade de BALF necessário para posterior preparação de amostras, isso pode não deixar material suficiente para realizar todos os experimentos desejados. BAL em gado tem sido utilizado por vários grupos de pesquisa e muitosdiferentes parâmetros foram examinados sob várias condições. A maior parte dos autores realizaram lavagem dos lóbulos basais 43,45,46, mas a quantidade de líquido utilizada para a lavagem difere entre os grupos de pesquisa. Isto leva a inconsistências na diluição das células recuperadas, proteínas e outras substâncias, o que torna difícil comparar os resultados de diferentes publicações. Portanto, para o uso em bovinos, recomenda-se a lavagem com cinco fracções de 20 ml (ou seja, de 100 ml no total) do corpo quente, solução salina isotónica, que são recuperados imediatamente após a instilação. Quando se utiliza um cateter lavado com um grande diâmetro (isto é,> 2 mm), o volume de cada fracção precisa de ser ligeiramente aumentada, dependendo da quantidade de líquido que permanece no cateter.
A anatomia altamente segmentado do pulmão bovino leva a uma limitação metódico; os resultados obtidos a partir de uma parte do pulmão pode não ser verdadeiro para o resto do pulmão. Uma vez que não há écontrole de vista a área de todo pulmão sondado por biópsia transbrônquica e lavado, o examinador não pode saber se as áreas amostradas eram saudáveis ou doentes. Portanto, é muito importante amostrar locais onde o fungo foi inoculado antes, a fim de ter uma taxa de recuperação mais elevada do agente patogénico e que têm uma possibilidade mais elevada de amostragem áreas pulmonares doentes. Outra limitação é o aumento do risco anestésico em animais de má condição clínica. Os métodos descritos devem ser utilizados apenas em modelos de doença leve a moderada para manter o peso para os animais tão baixas quanto possível. Anestesia geral em ruminantes deve sempre ser o mais curto possível, como o desenvolvimento de gás no rúmen aumenta o risco anestésico nestas espécies. Os animais devem ser colocados em decúbito ventral, imediatamente após a broncoscopia para permitir o efluxo do gás desenvolvido e tem de ser cuidadosamente monitorizado até que sejam completamente recuperado da anestesia. Além disso, as técnicas descritas não são suitasável por amostragem intervalos de menos de 24 horas.
O protocolo descrito pode ser adaptado a outros agentes infecciosos. Inoculação endoscópica de vários agentes patogénicos tem sido descrito, tal como C. psittaci 32-34, Pasteurella haemolytica 38-40,42, Haemophilus somni 55, e vírus da diarréia viral bovina 44. Além disso, os locais de depósito do patógeno no pulmão pode ser adaptada para o modelo desejado. Ao escolher os locais de amostragem, alguns fatos importantes devem ser levados em conta: locais (i) A amostragem deve ser escolhido com base nos locais de inoculação e nos achados patológicos esperados. (Ii) Quando a necropsia deve ser realizada é preciso ter cuidado para deixar suficientes áreas pulmonares não amostrados para ex vivo de amostragem. (Iii) os locais de pontos de amostragem deve ser escolhida de modo que pode ser alcançado com o equipamento. Especialmente para a biópsia pulmonar transbrônquica, há limitações devido ao comprimento da pinça de biópsia. (Iv) Tele ordem de amostragem é importante, escovado brônquico e biópsia pulmonar transbrônquica pode levar a pequenos sangramentos, o que contaminaria a LBA. Portanto, LBA deve ser sempre obtido em primeiro lugar. Quando se utiliza o protocolo de outras espécies, a anatomia do pulmão específica da espécie devem ser tidas em conta.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors are very thankful to the Federal Ministry of Education and Research (BMBF) of Germany for the funding of their work. Also, the authors thank Ines Lemser, Sylke Stahlberg, Ingolf Rücknagel and all the other colleagues working in the team of the animal house (FLI, Germany) for their technical assistance with the bronchoscopies. They are very thankful to Maria-Christina Haase (FLI, Germany) for her help in providing literature. Furthermore, the authors wish to express their gratitude to Dr. Angela Berndt (FLI, Germany) and Nicolette Bestul (University of Wisconsin-River Falls) for critical reading of the manuscript.
Materials
| Veterinary Video Endoscope | Karl Storz GmbH & Co. KG, Tuttlingen, Germany | PV-SG 22–140 | diameter: 9 mm, working channel: 2,2 mm, working length 140 cm |
| lavage catheter | Karl Storz GmbH & Co. KG, Tuttlingen, Germany | diameter: 2 mm; length: 180 cm, Luer-lock-adapter | |
| acuator | WEPA Apothekenbedarf GmbH & Co KG, Hillscheid, Germany | 32660 | length: 60 mm |
| biopsy forceps | Karl Storz GmbH & Co. KG, Tuttlingen, Germany | REF 60180LT | 1.8 mm, serrated, oval |
| Omnifix 20 ml, Luer-Lock | B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | 4617207V | |
| cytology brush | mtp GmbH, Neuhausen ob Eck, Germany | 110240-10 | working length 180 cm, brush length: 15 mm, diameter 1.8 mm |
| iv acess | Henry Schein Vet GmbH, Hamburg, Germany | 370-211 | diameter 1.2 mm, length 43 mm |
| Rompun 2% (xylazin) | Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany | 0.2 mg/kg bodyweight | |
| Ketamin 10% (ketamine) | bela-pharm GmbH & Co. KG, Vechta, Germany | 2.0 mg/kg bodyweight | |
| isotonic saline solution | B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | 3200950 | |
| SUB 6 waterbath | CLF analytische Laborgeräte GmbH, Emersacker, Germany | n/a | |
| metal tube speculum | n/a | n/a | diameter: 3.5 cm, length: 35 cm |
| flashlight | n/a | n/a | |
| siliconized glass bottles | n/a | n/a | siliconize with Sigmacote (Sigma-Aldrich Co. LLC) |
| Omnifix Luer 3 ml | B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | 4616025V | |
| Omnifix Luer 5 ml | B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | 4616057V | |
| sealing plugs | Henry Schein Vet GmbH, Hamburg, Germany | 900-3057 | |
| inoculum | n/a | dilute pathogen in 8mL buffer |
References
- Ireland, J. J., Roberts, R. M., Palmer, G. H., Bauman, D. E., Bazer, F. W. A commentary on domestic animals as dual-purpose models that benefit agricultural and biomedical research. Journal of animal science. 86, 2797-2805 (2008).
- Persson, C. G. Con: mice are not a good model of human airway disease. American journal of respiratory and critical care medicine. 166, 6-7 (2002).
- Haley, P. J. Species differences in the structure and function of the immune system. Toxicology. 188, 49-71 (2003).
- Hein, W. R., Griebel, P. J. A road less travelled: large animal models in immunological research. Nature reviews. Immunology. 3, 79-84 (2003).
- Mestas, J., Hughes, C. C. Of mice and not men: differences between mouse and human immunology. J Immunol. 172, 2731-2738 (2004).
- Elferink, R. O., Beuers, U. Are pigs more human than mice. Journal of hepatology. 50, 838-841 (2009).
- Jawien, J., Korbut, R. The current view on the role of leukotrienes in atherogenesis. Journal of physiology and pharmacology : an official journal of the Polish Physiological Society. 61, 647-650 (2010).
- Seok, J., et al. Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 3507-3512 (2013).
- Pabst, R. . Allergy and Allergic Diseases. 1, (2009).
- Bovine Genome, S., et al. The genome sequence of taurine cattle: a window to ruminant biology and evolution. Science. 324, 522-528 (2009).
- Tellam, R. L., et al. Unlocking the bovine genome. BMC genomics. 10, 193 (2009).
- Graphodatsky, A. S., Trifonov, V. A., Stanyon, R. The genome diversity and karyotype evolution of mammals. Molecular cytogenetics. 4, 22 (2011).
- Kirschvink, N., Reinhold, P. Use of alternative animals as asthma models. Current drug targets. 9, 470-484 (2008).
- Coleman, R. A. Of mouse and man–what is the value of the mouse in predicting gene expression in humans. Drug discovery today. 8, 233-235 (2003).
- Kips, J. C., et al. Murine models of asthma. The European respiratory journal. 22, 374-382 (2003).
- Coraux, C., Hajj, R., Lesimple, P., Puchelle, E. In vivo models of human airway epithelium repair and regeneration. European Respiratory Review. 14, 131-136 (2005).
- McLaughlin, R. F., Tyler, W. S., Canada, R. O. A Study of the Subgross Pulmonary Anatomy in Various Mammals. American Journal of Anatomy. , 149-165 (1961).
- Robinson, N. E. Some functional consequences of species differences in lung anatomy. Adv Vet Sci Comp Med. 26, 1-33 (1982).
- Lekeux, P., Hajer, R., Breukink, H. J. Effect of Somatic Growth on Pulmonary-Function Values in Healthy Friesian Cattle. Am J Vet Res. 45, 2003-2007 (1984).
- Veit, H. P., Farrell, R. L. The anatomy and physiology of the bovine respiratory system relating to pulmonary disease. Cornell Vet. 68, 555-581 (1978).
- Gallivan, G. J., McDonell, W. N., Forrest, J. B. Comparative pulmonary mechanics in the horse and the cow. Res Vet Sci. 46, 322-330 (1989).
- Hunter, K. S., et al. In vivo measurement of proximal pulmonary artery elastic modulus in the neonatal calf model of pulmonary hypertension: development and ex vivo validation. Journal of applied physiology. 108, 968-975 (2010).
- Stenmark, K. R., et al. Severe pulmonary hypertension and arterial adventitial changes in newborn calves at 4,300 m. Journal of applied physiology. 62, 821-830 (1987).
- Tian, L., et al. Impact of residual stretch and remodeling on collagen engagement in healthy and pulmonary hypertensive calf pulmonary arteries at physiological pressures. Annals of biomedical engineering. 40, 1419-1433 (2012).
- Van Rhijn, I., Godfroid, J., Michel, A., Rutten, V. Bovine tuberculosis as a model for human tuberculosis: advantages over small animal models. Microbes and infection / Institut Pasteur. 10, 711-715 (2008).
- Otto, P., et al. A model for respiratory syncytial virus (RSV) infection based on experimental aerosol exposure with bovine RSV in calves. Comparative immunology, microbiology and infectious diseases. 19, 85-97 (1996).
- Gershwin, L. J., et al. A bovine model of vaccine enhanced respiratory syncytial virus pathophysiology. Vaccine. 16, 1225-1236 (1998).
- Gershwin, L. J. Immunology of bovine respiratory syncytial virus infection of cattle. Comparative immunology, microbiology and infectious diseases. 35, 253-257 (2012).
- Jaeger, J., Liebler-Tenorio, E., Kirschvink, N., Sachse, K., Reinhold, P. A clinically silent respiratory infection with Chlamydophila spp. in calves is associated with airway obstruction and pulmonary inflammation. Veterinary research. 38, 711-728 (2007).
- Martinez-Olondris, P., Rigol, M., Torres, A. What lessons have been learnt from animal models of MRSA in the lung. The European respiratory journal. 35, 198-201 (2010).
- Sadowitz, B., Roy, S., Gatto, L. A., Habashi, N., Nieman, G. Lung injury induced by sepsis: lessons learned from large animal models and future directions for treatment. Expert review of anti-infective therapy. 9, 1169-1178 (2011).
- Ostermann, C., et al. Infection, Disease, and Transmission Dynamics in Calves after Experimental and Natural Challenge with a Bovine Chlamydia psittaci Isolate. PloS one. 8, (2013).
- Ostermann, C., Schroedl, W., Schubert, E., Sachse, K., Reinhold, P. Dose-dependent effects of Chlamydia psittaci infection on pulmonary gas exchange, innate immunity and acute-phase reaction in a bovine respiratory model. Vet J. 196, (2012).
- Reinhold, P., et al. A bovine model of respiratory Chlamydia psittaci infection: challenge dose titration. PloS one. 7, (2012).
- Reinhold, P., Sachse, K., Kaltenboeck, B. Chlamydiaceae in cattle: commensals, trigger organisms, or pathogens. Vet J. 189, 257-267 (2011).
- Dionisio, J. Diagnostic flexible bronchoscopy and accessory techniques. Revista portuguesa de pneumologia. 18, 99-106 (2012).
- Hilding, A. C. Experimental bronchoscopy: resultant trauma to tracheobronchial epithelium in calves from routine inspection. Trans Am Acad Ophthalmol Otolaryngol. 72, 604-612 (1968).
- Potgieter, M. M., Hopkins, F. M., Walker, R. D., Guy, J. S. Use of fiberoptic bronchoscopy in experimental production of bovine respiratory tract disease. Am J Vet Res. 45, 1015-1019 (1984).
- Ackermann, M. R., Kehrli Jr, M. E., Brogden, K. A. Passage of CD18- and CD18+ bovine neutrophils into pulmonary alveoli during acute Pasteurella haemolytica pneumonia. Veterinary pathology. 33, 639-646 (1996).
- Malazdrewich, C., Ames, T. R., Abrahamsen, M. S., Maheswaran, S. K. Pulmonary expression of tumor necrosis factor alpha, interleukin-1 beta, and interleukin-8 in the acute phase of bovine pneumonic pasteurellosis. Veterinary pathology. 38, 297-310 (2001).
- Wells, A. U. The clinical utility of bronchoalveolar lavage in diffuse parenchymal lung disease. European respiratory review : an official journal of the European Respiratory Society. 19, 237-241 (2010).
- Wilkie, M. R. Sequential titration of bovine lung and serum antibodies after parenteral or pulmonary inoculation with Pasteurella haemolytica. Am J Vet Res. 40, 1690-1693 (1979).
- Pringle, J. K., et al. Bronchoalveolar lavage of cranial and caudal lung regions in selected normal calves: cellular, microbiological, immunoglobulin, serological and histological variables. Canadian journal of veterinary research = Revue canadienne de recherche veterinaire. 52, 239-248 (1988).
- Silflow, R. M., Degel, P. M., Harmsen, A. G. Bronchoalveolar immune defense in cattle exposed to primary and secondary challenge with bovine viral diarrhea virus. Veterinary immunology and immunopathology. 103, 129-139 (2005).
- Mitchell, G. B., Clark, M. E., Caswell, J. L. Alterations in the bovine bronchoalveolar lavage proteome induced by dexamethasone. Veterinary immunology and immunopathology. 118, 283-293 (2007).
- Mitchell, G. B., Clark, M. E., Siwicky, M., Caswell, J. L. Stress alters the cellular and proteomic compartments of bovine bronchoalveolar lavage fluid. Veterinary immunology and immunopathology. 125, 111-125 (2008).
- Lordan, J. L., et al. Cooperative effects of Th2 cytokines and allergen on normal and asthmatic bronchial epithelial cells. J Immunol. 169, 407-414 (2002).
- Tukey, M. H., Wiener, R. S. Population-based estimates of transbronchial lung biopsy utilization and complications. Respiratory medicine. 106, 1559-1565 (2012).
- Braun, U., Estermann, U., Feige, K., Sydler, T., Pospischil, A. Percutaneous lung biopsy in cattle. Journal of the American Veterinary Medical Association. 215, 679-681 (1999).
- Burgess, B. A., et al. The development of a novel percutaneous lung biopsy procedure for use on feedlot steers. Canadian journal of veterinary research = Revue canadienne de recherche veterinaire. 75, 254-260 (2011).
- Sydler, T., Braun, U., Estermann, U., Pospischil, A. A comparison of biopsy and post-mortem findings in the lungs of healthy cows. Journal of veterinary medicine. A, Physiology, pathology clinical medicine. 51, 184-187 (2004).
- Voigt, K., et al. PCR examination of bronchoalveolar lavage samples is a useful tool in pre-clinical diagnosis of ovine pulmonary adenocarcinoma (Jaagsiekte). Research in Veterinary Science. 83, 419-427 (2007).
- Caldow, G. Bronchoalveolar lavage in the investigation of bovine respiratory disease. In Practice. 1, 41-43 (2001).
- Heilmann, P., Müller, G., Reinhold, P. Bronchoscopy and Segmental Bronchoalveolar Lung Lavage of Anesthetised Calf. Monatsh. Veterinärmed. 43, 79-84 (1988).
- Gogolewski, R. P., et al. Protective ability and specificity of convalescent serum from calves with Haemophilus somnus pneumonia. Infection and immunity. 55, 1403-1411 (1987).
