Controlada por laceração do colo do útero em camundongos

1. Preparação Animal e Aplicação do Stabilizer Spine A coluna cervical do rato é côncava ventralmente como pode ser visto a partir da visão lateral. Os processos espinhosos de C3 a T1 são pequenos e friável e, por conseguinte, não são adequados para a estabilização vertebral, tal como descrito geralmente 3,4. Recomendamos que a estabilização da coluna ser realizada pela fixação faceta lateral. O dispositivo de fixação é composto de um canal de metal em forma de U para apoiar o mouse e dois braços de aço inoxidável ajustáveis ​​que prenda a cada faceta lateralmente. Isto proporciona um excelente imobilização da vértebra alvo. Após a fixação da coluna vertebral, a coluna vertebral é ligeiramente elevada para achatar a curvatura da coluna vertebral cervical, para proporcionar uma melhor exposição da medula espinhal. Esterilizar os seguintes instrumentos cirúrgicos: 2-3 pares de fórceps, 2 pares de microtesoura, um porta-30 G agulha de sutura e de agulhas, grampos de pele e clipe aplicador. Desinfetar o estabilizador da coluna. Anesthetize o rato usando um cocktail intraperitoneal de cetamina / xilazina (100 mg / 10 mg / kg). Raspar o cabelo do pescoço do mouse. Após a limpeza da pele com uma solução de iodo-povidona e álcool a 70%, mova o mouse sobre a mesa de operação aquecido com uma almofada de aquecimento. Cubra os olhos do animal com pomada oftálmica para evitar a secagem da córnea. Após a indução da anestesia (alcançado quando o mouse não responde a uma pitada de cauda), fazer uma incisão de pele na linha média cervical posterior do occipital à gordura subcutânea-pad da coluna cervical inferior. Sob ampliação, realizar uma incisão na linha entre os músculos trapézio em C2 e dividir os músculos capitis Semispinalis. Identificação da almofada de gordura submuscular facilita dissecção na camada correcta. Estender a dissecção muscular mediana caudal ao processo espinhoso T2, que serve como um ponto de referência fiável. Cortar os músculos ligados à vértebra T2 e remover a parte cartilaginosa da T2processo espinhoso. Dissecar músculos paravertebrais de C2 a T2 por meio da lâmina utilizando um par de micro-tesouras. Dissecção muscular começa ao lado dos processos espinhosos e se estende bilateralmente para as articulações. Separa-se os músculos imediatamente adjacentes aos processos espinhosos e as lâminas (na camada de periósteo) para minimizar o sangramento. Após as facetas laterais estão expostos, coloque o mouse sobre o canal em forma de U do palco LISA. Prenda os braços de aço inoxidável sob as facetas expostas bilateralmente. Uma vez que os braços estão no lugar, aperte os parafusos dos braços de aço para imobilizar a coluna vertebral. Isso mantém firme fixação da vértebra alvo e fornece excelente exposição solar. Os braços podem ser ajustados para proporcionar exacta orientação horizontal da coluna. Incisão no ligamento amarelo entre C5 e C6 para expor subjacente dura. Entre o espaço interlaminar utilizar uma agulha de 30 G para criar um pequeno durotomy através da qual são colocadas ao microtesouraalargar o durotomy. A medula espinhal está agora preparado para sofrer a lesão laceração controlada. 2. Cervical Laceration Medular Utilizar o dispositivo LISA A largura do alargamento da medula espinhal cervical varia em diferentes níveis. Adicione uma lesão de hemi secção dorsal em C5-6, utilizando uma lâmina plana 2,3 milímetros e definir a amplitude de vibração para cobrir toda a largura da medula espinhal. As lâminas são obtidas a partir de belas Ciência Tools Inc. (Foster City, CA) e modificada por laceração espinal medula. Manter a amplitude da oscilação da lâmina em ≥ menos 0,5 mm, como baixos níveis de amplitude diminuirá a facilidade de laceração cabo. Posicione o estabilizador da coluna e do rato no palco LISA. A lâmina está ligada à LISA com a sua posição controlada por micro-controladores capazes de três intervalos de movimento. Componentes da LISA e suas funções são descritas na Figura 1. Tensão do interruptor de lâmina oscilante em. Sob magnifcação, mova o mouse para que a medula espinal exposta é posicionado diretamente sob a lâmina vibrar. Elevar a fase de suporte do rato para a lâmina oscilante. A posição "0" é gravado, quando a lâmina mal toca na veia dorsal da medula espinhal. Meça a profundidade da laceração da medula espinal em relação à posição "0". Elevar a posição palco por controle micro-motorista: um giro de 360 ​​° do botão de micro-controlador eleva o estágio em 0,25 mm. Assim, uma lesão mm hemisection dorsal 0,75 é criado girando o botão de micro-controlador de 3 vezes. A precisão da lesão é de ± 0,01 mm. À medida que a lâmina começa a rasgar a medula espinal, lubrificar o campo cirúrgico com irrigação salina. A profundidade de corte da medula espinal é controlada pelo micro-controlador vertical e é independente da orientação visual. Uma vez que a profundidade pré-determinada foi alcançada, ligue o interruptor de vibração off. Idealmente, a lâmina oscilante está posicionada no lgap esion sem evidência de deformação do tecido. Abaixe o palco da lâmina de corte e remover o sangue e soro fisiológico do campo cirúrgico com uso de algodão Q-dicas. Hemostasia ocorre espontaneamente em <1 min. Solte o mouse do estabilizador da coluna vertebral. Aproximados dos músculos paravertebrais, utilizando fio de seda 6-0 e fechar a pele ferida com grampos de aço inoxidável Michel. 3. Animal Care Via subcutânea injetar um total de 1-2 ml de soro fisiológico para manter a hidratação adequada e coloque o rato na gaiola de recuperação em uma almofada de aquecimento, enquanto recuperar a consciência. Fornecer água e comida ad lib suave e administrar analgésicos por 48 horas de pós-operatório. Não há necessidade de cuidados da bexiga após hemisecção dorsal da medula espinhal.