再現性を作成するための新たな手法<em生体内で></emマウスにおける頸髄損傷の裂傷>モデルが記載されている。この技術は、±0.01程度の精度で振動ブレードを用いて脊髄の頸部のファセット及び裂傷の固定により、脊椎安定化に基づいている。
遺伝子改変マウスの使用は、脊髄損傷(SCI)など、いくつかの神経疾患の根底にある分子機構の理解を向上させます。 SCIの裂傷モデルを生成するために使用されるフリーハンド手動制御は、多くの場合、クラッシュまたは挫傷コンポーネントと、それゆえ、新しい技術が開発されたものに関連付けられている一貫性のない怪我を作成します。我々の子宮頸部裂傷SCIのモデル1を組み込むことにより、フリーハンド方式に固有の困難を解決した)椎骨ファセット固定によって頚椎安定化、2)強化された脊髄露出、と振動ブレードを使用して脊髄の再現可能な裂傷の3)の作成関連する挫傷せず、深さ±0.01ミリメートルの精度。このようなメスやはさみのフリーハンドの使用などのSCI裂傷を作成する標準的な方法に比べて、我々の手法は、一貫した病変を生産している。このメソッドはcorticospの軸索再生の研究に有用ですinal、赤核脊髄、そして背昇順広大。
遺伝子改変マウスの可用性は、SCIのメカニズムの役割を果たす特定の遺伝子の影響を識別するための強力なツールです。裂傷SCIこれは損傷8以下の効果的な治療を提供することができる治療薬または分子を調べるために使用される重要なモデルである。マウスで裂傷の傷害の作成 時に棘突起の固定が原因で脊椎固定5,11の維持に関与して薄くて壊れやすい棘突起を把握するのが困難に不正確である。わずか0.2ミリメートル(マウス脊髄の直径の10%)の裂傷の深さのばらつきは、データの解釈を誤解を招く原因となる。脊髄裂傷病変の性質と程度を正確に10を定義する必要があります。この課題に対処するため、我々は、椎安定からなる新規技術を開発し、ルイビル傷害システム装置に接続されている製作のブレードを使用している(LISA)が裂傷SCI 7,14を生成する。この損傷は、裂傷プロセスの間、組織の変形を回避鋭い振動ブレードを使用して作成された。裂傷の深さは、裂傷の深さを制御するマイクロドライバを使用して0.01ミリメートルの精度に精密だった。カッティングブレードは希望裂傷輪郭9を作成するには 、特定の形状や幅に、カスタムメイドされています。我々は、1)頚椎露光、2の方法)両側性ファセット固定装置を用いて椎安定化する技術、及び振動ブレードを用いて子宮頸部裂傷損傷の3)の作成を示す。
脊髄への裂傷の傷害の前に椎安定化が棘突起の固定によって得られた。マウスのT1を通してC3から砕けやすい短い頚椎棘突起へのクランプの頸椎前湾カーブと添付ファイルの両方が効果的な脊椎安定化を防ぐ。さらに、手動制御の下で利用カミソリの刃やmicroscissorsの使用は6病変の深さの変動を作成する重要な組織の変形を引き起こす。これは、特定の経路の軸索再生が研究され、特にデータの誤った解釈につながる可能性があります。背側皮質脊髄路が完全lesioning時に離断されていない場合、例えば、免れる背側皮質軸索が再生軸索として誤解されることがあります。これらの課題は、単一レベルおよび脊髄の正確なlesioningにおけるファセットに固定するとともに脊椎安定化装置を使用することによって克服することができる。また、ああを使用IGHの周波数振動ブレードは、隣接脊髄を粉砕またはcontusingなし鋭い裂傷を生成します。この方法は、マウス6の胸部脊髄裂傷を生成するための後続の修正を、ラット9,12,14における脊髄裂傷の傷害を生成するために使用されている。本通信では、マウスにおける信頼性子宮頸部病変裂傷を作成する方法を説明する。
脊髄の前後径は、マウスで<2mmである限り、裂傷病変の正確な深さは信頼性のある実験モデルを作成する上で不可欠です。病変の深さの最小の変動性が大きく軸索再生と同様に、体積や行動の研究を評価する実験の結果を変更します。我々は、切断ブレードの位置を制御する高精度のマイクロドライバを使用したため、この方法を用いて病変部の深さの精度は±0.01 mmである。この方法はで矛盾を減少している裂傷SCIを作成する他のモデルでエラン。この方法は、このような皮質脊髄路、赤核脊髄路、および背側大動脈路として脊髄の背側半分に位置し、長い脊髄経路の軸索再生の研究に特に便利です。この方法では、これらの繊維路が完全かつ確実に切開することができる。この点において、データの解釈の誤差することにより、SCIに関する実験的研究の報告の信頼性を向上させる、最小限に抑えられる。
要約すると、我々は、マウスにおける頸髄裂傷の傷害のin vivoモデルにおいて再現を作成するための新規な技術を記載している。この手法は、振動ブレードを使用して脊髄の子宮頸部の側面と裂傷の固定により、脊椎安定化に基づいています。マウス6の背側胸部脊髄裂傷モデルでは、このメソッドを使用して、我々は裂傷の深さ、組織型との間に緊密な相関関係を示した、と行動回復。そのような技術はまた、いくつかの他の研究室2,12によって信頼性があることが見出されている。
The authors have nothing to disclose.
このデバイスの開発はLISA㈱、ルイビル、ケンタッキー州によってサポートされていました。またXMXにCBS、およびNIH NS050243、NS052290、そしてNS059622に、ノートンのヘルスケアの継続的なサポートを認めるルイビル、ケンタッキー州。
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
Mice vertebral stabilizer | Louisville Impactor System | Stabilize and expose the cervical vertebra | |
LISA vibraknife | Louisville Impactor System | Produce the laceration injury of the cervical spinal cord | |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15013-12 | Skin and trapezius muscle incision |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15023-10 | Separate muscles from the laminae |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15002-08 | Incision of dura |
Graefe forceps | Fine Science Tools (USA) | 11154-10 | Retract skin |
Dumont #7 forceps | Fine Science Tools (USA) | 11274-20 | Muscle retraction (tip modified)(Fig. A) |
Dumont SS forceps | Fine Science Tools (USA) | 11203-25 | Fixation of vertebra (tip modified )(Fig.B) |
30G needle | Becton Dickenson | 305106 | Create a dural opening |
6-0 suture | Ethicon | 8806H | Close muscle and fascial layers |
wound clip | Fine Science Tools (USA) | 12031-07 | Skin closure |
Tribromoethanol (Avertin) | Sigma-Aldrich | 90710-10G | Anesthetic agent |
Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-mail: cbshields1@gmail.com Fine Science Tools (USA), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-mail: info@finescience.com Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ USA 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis, MO, USA, 63178 (314) 771-5765, E-mail: cssorders@sial.com |
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Figure A is the modified Dumont #7 forceps; B is the modified Dumont SS forceps. |