Controlado lesiones laceración cervical en ratones

1. Preparación de los animales y la aplicación del estabilizador de la columna vertebral El ratón de la columna cervical es cóncava ventralmente como se ve desde la vista lateral. Las apófisis espinosas de C3 a T1 son pequeñas y friable y, por lo tanto, no son adecuados para la estabilización vertebral comúnmente descrito como 3,4. Recomendamos estabilización de la columna se realizó mediante fijación faceta lateral. El dispositivo de fijación consiste en un canal de metal en forma de U para soportar el ratón y dos brazos ajustables de acero inoxidable que la abrazadera a cada faceta lateralmente. Esto proporciona una excelente inmovilización de la vértebra de destino. Después de la fijación espinal, la columna vertebral está ligeramente elevado para aplanar la curvatura de la columna cervical para proporcionar una mejor exposición de la médula espinal. Esterilizar los siguientes instrumentos quirúrgicos: 2-3 pares de pinzas, 2 pares de micro tijeras, un soporte 30 G aguja, sutura y agujas, clips de la piel y del aplicador del clip. Desinfectar el estabilizador de la columna vertebral. Anesthetize el ratón usando un cóctel intraperitoneal de ketamina / xilazina (100 mg / 10 mg / kg). Afeitar el pelo del cuello del ratón. Después de limpiar la piel con una solución de povidona yodada y alcohol al 70%, mueva el ratón sobre la mesa de operaciones calentado con una almohadilla térmica. Cubra los ojos del animal con pomada oftálmica para prevenir la sequedad de la córnea. Después de la inducción de la anestesia (alcanzado cuando el ratón no responde a una pizca de cola), haga una línea media incisión cervical posterior del occipucio a la grasa subcutánea-pad de la columna cervical inferior. En ampliación, realice una incisión entre los músculos trapecio en C2 y dividir los músculos semiespinoso de la cabeza. Identificación de la almohadilla de grasa submuscular facilita la disección en la capa correcta. Extender la disección muscular línea media caudalmente a la apófisis espinosa T2, el cual sirve como un punto de referencia fiable. Cortar los músculos vinculados a la vértebra T2 y quitar la parte cartilaginosa de la T2apófisis espinosa. Diseccionar los músculos paraespinales de la C2 a través de las láminas T2 utilizando un par de micro-tijeras. La disección del músculo comienza adyacente a las apófisis espinosas y se extiende bilateralmente a las articulaciones facetarias. Separar los músculos inmediatamente adyacentes a las apófisis espinosas y las láminas (en la capa perióstica) para minimizar el sangrado. Después de las facetas laterales están expuestos, coloque el puntero del ratón sobre el canal en forma de U de la etapa de LISA. Coloque los brazos de acero inoxidable debajo de las caras expuestas bilateralmente. Una vez que los brazos están en su lugar, apriete los tornillos de los brazos de acero para inmovilizar la columna. Esto mantiene firme fijación de la vértebra destino y proporciona una excelente exposición. Los brazos pueden ajustarse para proporcionar la orientación horizontal exacta de la columna vertebral. Incisión en el ligamento amarillo entre C5 y C6 exponer subyace dura. Entre el espacio interlaminar, utilizar una aguja de 30 G para crear una pequeña durotomía través de la cual micro tijeras se colocan aampliar el durotomía. La médula espinal está dispuesto a someterse a la lesión desgarro controlado. 2. Laceración cervical de la médula espinal Uso del dispositivo LISA La anchura de la ampliación de la médula espinal cervical varía en los diferentes niveles. Hacer una lesión de hemisección dorsal en C5-6 utilizando una cuchilla plana de 2,3 mm y ajustar la amplitud de la vibración para cubrir toda la anchura de la médula espinal. Las cuchillas se obtuvieron a partir de Bellas Ciencia Tools Inc. (Foster City, CA) y modificar para laceración de la médula espinal. Mantener la amplitud de la oscilación de la cuchilla en ≥ 0,5 mm, como los niveles de amplitud más bajas disminuirán la facilidad de laceración espinal. Coloque el estabilizador de la columna vertebral y el ratón en el escenario LISA. La cuchilla está unido a la LISA con su posición controlada por micro-controladores capaces de tres rangos de movimiento. Componentes de la Lisa y sus funciones se describen en la Figura 1. Encienda el interruptor de cuchilla vibrante sucesivamente. Bajo magnifmedicación, mueva el ratón para que la médula espinal expuesta se coloca directamente debajo de la cuchilla vibrante. Eleve la plataforma de soporte el ratón hacia la cuchilla oscilante. La posición "0" se registra cuando la hoja apenas toca la vena dorsal de la médula espinal. Medir la profundidad de la laceración de la médula espinal en relación con la posición "0". Elevar la posición de fase de control micro-controlador: un giro de 360 ​​º de la perilla micro-controlador eleva la etapa en 0,25 mm. Por lo tanto, una lesión de hemisección dorsal mm 0,75 se crea girando el botón de micro-controlador 3 veces. La precisión de la lesión es de ± 0,01 mm. A medida que la hoja empieza a lacerar la médula espinal, lubricar el campo quirúrgico con irrigación salina. La profundidad de corte de la médula espinal es controlado por el micro-controlador vertical y es independiente de la orientación visual. Una vez que se ha alcanzado la profundidad predeterminada, gire el interruptor de vibración fuera. Idealmente, la hoja oscilante se coloca en el lbrecha Esion sin evidencia de deformación del tejido. Baje la etapa de la cuchilla de corte y quitar la sangre y solución salina del campo quirúrgico con algodón Q-tips. La hemostasia se produce espontáneamente en <1 min. Suelte el botón del estabilizador de la columna vertebral. Aproximados de los músculos paravertebrales con sutura de seda 6-0 y cerrar la piel herida con clips de acero inoxidable Michel. 3. Cuidado de Animales Por vía subcutánea inyectar un total de 1-2 ml de solución salina para mantener una hidratación adecuada y coloque el puntero del ratón en la jaula de recuperación en una almohadilla eléctrica, mientras que la recuperación de la conciencia. Proporcionar agua y alimentos blandos ad lib y administrar analgésicos durante 48 horas después de la operación. No hay necesidad para el cuidado de la vejiga después de la hemisección dorsal de la médula espinal.