Визуальное описание вскрытия головного сосудистой поверхности и связанного с мозговых оболочек и сосудистых сплетений из мозга крысы

Хотя это не показано в видео, крысы сначала дали передозировке 300 мг / кг фенобарбитала, в результате анестезии менее чем за 3 мин, а затем убили обезглавливание. Их мозг был затем быстро, но осторожно удалить из черепа и охлаждают в ледяной физиологический раствор в течение 5 мин. Важно, чтобы мозг прохладно для этого времени до рассечения MAV, так что MAV может быть отделена от поверхности коры (в верхней части слоя I). Мозг был помещен в нижней части стеклянное блюдо Петри отдыхает на льду, который был полон (1 см глубиной) ледяной физиологического раствора или 0,1 М фосфата натрия-солевой буфер рН = 7,4. Все вскрытие делается с мозгом, по большей части погружен в солевой раствор. 1. Удаление эпифиза Поместите мозг спинной стороной вверх (по отношению к нижней части чашки Петри). Шишковидной железы находится на самой хвостовой вентральной области между двумя полушариями только ростральнее тОн мозжечка (шишковидной выемки), а чуть ниже или на поверхности мозговых оболочек над холмов. Удалить шишковидной железы сначала с помощью двух маленьких щипцов чаевые согнуты. Это розовый цвет, как кора, но часто окружены остатками крови и сосудистой остаточной из мозга удаления. 2. Удаление MAV Поверните голову над "вверх ногами" и отделить позвоночной артерии, мелкие артерии и мозговой оболочки покрытие моста от сосудистой оболочки и переднего мозга. Снятие переднего мозга MAV затем начался. Важно, чтобы начать вентрально в процессе рассечения. Больших магистральных артерий круга Уиллиса, средней мозговой артерии (СМА) и передней артерии являются самыми сильными и служат в качестве "строительные леса", по которой меньше поверхностное артерий и артериол мягкой мозговой оболочки Мембрана может быть удален из коры с остатками мозговых оболочек. См. обзор Scremin 7 для мруды визуальных представлений и детали головного сосудистой поверхности. Начиная с обоих полушариях, используйте небольшие чаевые изогнутый пинцет, чтобы разорвать задней соединительной артерии только позади внутренней сонной этапе. Таким образом, отделяя более передней и задней артериальной деревьев переднего мозга. Повторите ту же процедуру для противоположного полушария. Захватывающий MCA и передней артерии с пинцетом, осторожно потяните в передне-спинной направлении, так что MAV покрытие передней брюшной коры (грушевидная, обонятельный бугорок) поднимается над и вокруг обонятельный тракт. Это устраняет большую часть MAV покрытие переднего мозга (cingulated и орбитальных). Включите мозг на 45 до 90 ° углом к ​​чашке Петри. Боковые, более передних регионов MAV окружающих боковых областях коры (гранулированный островной, среднего соматосенсорной и слуховой коры) может быть освобожден от коры, взявшись за MCA и связанных с ними артерийх годов и осторожно потянув сверху вдоль коры головного мозга. Если необходимо, концы пинцета может быть использован для подъема и освободить от крупных артерий мозга во время вскрытия. Теперь снимите задние боковые больше регионов MAV. (Обратите внимание, лучше всего, чтобы перейти из одного полушария в другое во время этого процесса уборки для того, чтобы MAV остается холодным и увлажненной. Кроме того, если сопротивление в освобождении MAV от коры головного мозга встречаются на одном полушарии переключатель контралатерального полушария временно , а затем вернуться к первоначальному полушарии позже). Для удаления самого спинного регионов MAV окружающих первичной соматосенсорной и моторной коры включить мозг спинной стороной вверх (по отношению к нижней части чашки Петри). Чтобы окончательно освободиться от MAV мозга, использовать концы щипцами вдоль сагиттальной пазухи. Эта часть заготовленной MAV могут быть либо сохранены временно в ледяной солевой до тестирования и анализа или замороженные для последующей обработки. ЧастоMAV, охватывающих наиболее задние / хвостового областей коры (энторинальной, визуальных и наиболее хвостового кору слуховых) остается прикрепленным к коре головного мозга. Его удаление показано позже в видео, когда MAV между ретроспленальной мозга и вышележащих холмов расчленены. 3. Удаление сосудистых сплетений Установите мозг спинной стороной вверх и зафиксировать на месте с большим пинцетом нажмите меньше щипцов вниз по средней линии между полушариями, а затем использовать концов прокол через кору и мозолистого тела (≈ -3,3 мм от брегмы) в верхней части средней линии гиппокампа. Используйте щипцы, чтобы вытащить коры с мозолистого тела от дорсального гиппокампа и перегородки, обнажив большую часть бокового желудочка. Сосудистого сплетения могут быть расположены и определены красной волнистой линией разграничения основной артерии, которая проходит его длины. Использование двух концах щипцов, чтобы вырвать боковых стенках третьего VENtricle и увеличить ее в самый хвостового конца (≈ -4,3 мм от брегмы 8). С помощью небольшого пинцета, тянуть эту конца сосудистое сплетение бесплатно. Затем перейдите на самом переднем области между перегородкой и хвостатых / скорлупы (наиболее ростральной степени ≈ 1,6 мм от брегмы) и с помощью пинцета увеличить этот раздел желудочка и вытащить сосудистое сплетение бесплатно. Выполните ту же процедуру на противоположной полушарии получить второе оставшиеся сосудистое сплетение. Опять же ткани могут быть либо сохранены временно в ледяной солевой до тестирования и анализа или замороженные для последующей обработки. 4. Удаление оставшегося MAV в 3-м желудочка Облегающие таламуса и холмов, а также о том, что более Хвостовой областей коры в том числе ретроспленальной, слуховой и зрительной коры Удалить все гиппокампа в обоих полушариях подвергая MAV на таламус и холмов. Удалениеэта часть MAV гораздо менее трудным, чем удаление MAV над корой. Потяните этой части MAV бесплатно, держа большую сосудистой покрывающей переднюю часть таламуса и осторожно потянув каудально. Это сосудистую подключен к сети холмов выше и поставляет кровь к дорсального гиппокампа и спинной сети таламуса. Вытащите его каудально и постепенно бесплатно supracollicular сети до достижения последних частях хвостового артериальной сосудистой круг. На данный момент, больше заботы должны быть приняты для удаления остатков задних вентральных MAV на поверхности гранулированного ретроспленальной, первичной слуховой и зрительной коры. Как и в других разделе MAV охватывающих более передней части коры, эта ткань может быть либо сохранены временно в ледяной солевой до тестирования и анализа или замороженные для последующей обработки. Любые оставшиеся задних вентральных MAV собран с этой второй части MAV должны быть удаленыD добавлено к первому расчлененный MAV раздел, посвященный коры, если они будут проанализированы отдельно. 5. Представитель Результаты При вскрытии выполнен правильно, в результате MAV ткани должна быть в двух интактных лиц весом от 35 до 45 мг всего. Первоначально расчлененный MAV окружающих большую часть коры должна весить около 25 мг и MAV охватывающие таламус, холмов и затылочной коры должна весить около 15 мг. Она должна быть слегка розоватого цвета от остаточной крови в сосудистой системе. Двусторонних сосудистое сплетение заготовленной должно быть в двух интактных образцов тканей с весом от 1 до 2 мг. Хотя избыток воды может быть удален из MAV до хранения или обработки с помощью папиросной бумаги, такие как, которая используется в объектив очистки, чтобы избежать потери ткани это не очень хорошая идея, чтобы удалить лишнюю воду из расчлененных сосудистое сплетение. Рис. 1 был создан для Сравнивая выражения Profil ES в трех регионах (полосатое тело, теменной коры и MAV) под контроль условий с использованием Agilent-014879 Всего генома крысы 4x44K 60mer олигонуклеотида массивов (G4131F, Agilent Technologies, Пало-Альто, Калифорния; NCBI GEO Присоединение # GPL7294; GSE23093 и GSE29733, которые присутствуют в хранилище NCBI GEO). Два участка на рисунке наглядно показывает выражение в 1) полосатом теле по сравнению с теменной коры и 2) MAV по сравнению с теменной коры. Понятно, что полосатое тело и теменной коре гораздо более тесно связаны друг с другом, чем MAV. Данные сравнения сосудистого сплетения с MAV будут представлены в будущей публикации. Однако, вполне вероятно, что выражение профилей в МАВ и сосудистое сплетение более тесно связаны друг с другом, чем они есть в стриатуме и теменной коры. 2 показана дифференциальное выражение гена ответ на гипертермия (EIH) по сравнению с AMPH в сравнении MAV контролировать и друг с другом. Содержание "> экспрессии генов более чем 11000 генов с официальными символами генов NCBI в MAV контрольных животных сравнивали с тех, которые записаны в полосатом теле и теменной коры. Более 2000 из этих генов были в 2,5 раза или более различные выражения в MAV по сравнению с двумя нейронов богатые ткани, и 550 генов был 10-кратным большее различие в выражении. Чуть более чем на 40% (253) из них были гены снижение экспрессии 10-кратное или более MAV и были связаны с функции нейронов. Существовали 343 генов с более чем 10-кратное или большее выражение в MAV по сравнению с теменной коре и полосатом теле. этот список генов была использована в качестве отправной точки, с которой для определения генов с очень высоким обогащением MAV. Таблица 1 приведены генов с более чем 15-кратное выражение в MAV по сравнению с теменной коре и полосатом теле и классифицирует их по отношению к функции. Многие из этих генов были связаны с сосудистой системой и / или иммунной системы. Эти тYpes генов должно быть обогащено около 5 – до 10 – кратного до из-за повышенной сосудистой себя и кровь присутствуют в нем. Тем не менее, даже для генов с известной общей сосудистой функции, увеличение выше 15-кратное указывает обогащения MAV. Существовали также числа генов с очень большой раз изменения, которые были: 1) белки внеклеточного матрикса (конкретно не связанных с сосудистой), 2) растворенного вещества перевозчиков и 3) липидов и метаболизм ретиноевой кислоты. Кроме того, несколько роста и дифференциации генов или транскрипционные факторы были найдены. Рисунок 1. Сравнение экспрессии генов в MAV с теменной коре и полосатом теле. Вулкан участок сравнении экспрессии генов уровней теменной коре и полосатом теле (верхний график) и теменной коры и MAV (нижний график). Красные символы обозначают гены, которые значительно отличаются betweан регионов при р <0,05, а 1,5-кратное или большее дифференциальные выражения между регионами. Черные символы представляют гены, которые существенно не отличаются между регионами (р> 0,05) и менее чем в 1,5 раза, отличающихся выражение. Розовые символы указывают генам с менее чем 1,5-кратную разницу в выражениях, но статистически значимое различие р <0,05. Желтые символы идентифицировать гены, которые имеют 1,5-кратное или большее выражение, но это изменение не является статистически значимым при р <0,05. Сокращения AMPH амфетамина EIH экологически-индуцированной гипертермии MAV мозговых оболочек и связанных с церебральной сосудистой Норма нормотермической контролирует Рисунок 2. Эффекты гипертермии и амфетамина на экспрессию генов в MAV. Вулкан участки сравненияэкспрессии генов уровней в MAV после солевого раствора, EIH или AMPH на 3 очка время часа. Красные символы обозначают гены, которые, как считается, будут существенно отличаться в то время как черные точки / круги представляют собой гены, которые существенно не отличаются между регионами. Дополнительный статистический анализ был использован для проверки которых выражение различий между контролем и лечение на самом деле были статистически значимыми. MAV Выражение мозга выражений NCBI ген Символы Специфика ткани или сообщили Функция (ы) > 50-кратное Anxa2, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, Kl, Lect1, Lepr, Lum, MYH11, OGN, Tagln, Thbs2, Tnnt2 Сосудистой и сердца > 50-кратное Ccl19, CD74, Defb1, Lrrc21, Mgl1, MRC1, Msln, Pla2g5, PRG4, RT1-Bb, RT1-Da Иммунная система > 50-кратное Adh1, AEBP1, Aldh1a2, Gstm2 Ретиноевой кислоты и липидов обработки > 50-кратное CDH1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, GPC3, Nupr1, OMD, Slamf9 Pcolce, Tmem27, Tspan8 Внеклеточной матрицы переходов и клетка-клетка > 50-кратное AQP1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr Ионный гомеостаз и растворенного > 50-кратное Alx3, Cdkn1c, Foxc2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 Развитие и регуляция транскрипции > 50-кратное Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 Неизвестный & Разное От 30 до 50-кратного </TD> Anxa1, Angpt2, C6, GJB2, Ptgis, Thbd, TIMP1 Сосудистой и сердца От 30 до 50-кратного Casp12, CCL2, CCR1, CD14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 Иммунная система От 30 до 50-кратного Col6a3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, MGP, Nid2 Внеклеточной матрицы переходов и клетка-клетка От 30 до 50-кратного Ср, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 Ионный гомеостаз и растворенного От 30 до 50-кратного CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 Ретиноевой кислоты и липидов обработки От 30 до 50-кратного BMP6, Casp12, DAB2 Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b Развитие и регуляция транскрипции От 30 до 50-кратного Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim Неизвестный & Разное От 15 до 30-кратного Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4 Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip , Vamp5, ВТН Сосудистой и сердца От 15 до 30-кратного Ada, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, Ctsc, DAP, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, MSC, Nfatc4, RT1-DB1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 Иммунная система От 15 до 30-кратного Adamtsl4, COL1A1, Crb3, АКДС, Egfl3, FBN1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, ММР14, Mmp23, PPIC, Serpinh1, Timp3 Внеклеточной матрицы переходов и клетка-клетка От 15 до 30-кратного Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 Ионный гомеостаз и растворенного От 15 до 30-кратного Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, RBP4 Ретиноевой кислоты и липидов обработки От 15 до 30-кратного ATF3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, ПСРФ, Sphk1, TGFBI, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 Развитие и регуляция транскрипции От 15 до 30-кратного Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, DSE, ENPEP, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, Mdk, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 Неизвестный & Разное * Гены, включенные в таблицы должны быть как более, чем 15-кратное выше выражение в стриатуме и рабепразолАль коры и 5-кратным выше фонового уровня. Меньшее из двух соотношений (MAV / стриатуме или MAV / теменная кора) для каждого гена были использованы для группировки. Гены находятся в эндотелиальных клетках, но также, вероятно, играют важную роль в обеспечении иммунных реакций. Таблица 1. Гены с 15-кратным * или более повышенная экспрессия в MAV по сравнению с стриатуме и теменной коры.