תיאור חזותי של Dissection של מערכת כלי הדם המוחית ומשטח קרום המוח הקשורים ודמה עין המקלעת ממוח חולדה

למרות שלא רואה בסרט, חולדות קבלו 1 מנת יתר של 300 מ"ג / ק"ג של פנטוברביטל, וכתוצאה מההרדמה בפחות מ 3 דקות, ולאחר מכן נהרגה על ידי עריפת ראש. מוחם היה אז במהירות אבל הוציא בזהירות מתוך הגולגולת וצנן במלח רגיל קר כקרח למשך 5 דקות. חשוב לתת למוח מגניב לסכום הזה של זמן לפני ביתור MAV כך שMAV ניתן להפריד את פני השטח של קליפת המוח (שכבה העליונה שלי). המוח הניח בתחתית צלחת פטרי זכוכית מונחת על קרח שהייתה מלא (1 סנטימטר עמוק) של קרח הקר pH 0.1 מ 'נתרן פוספט נאגר המלוח = 7.4 מלח הרגיל או. כל הנתיחה נעשתה במוח על פי רוב שקוע בתמיסת מלח. 1. הסרת בלוטת האצטרובל הנח את הצד הגבה מוח (יחסית לחלקו התחתון של צלחת פטרי). בלוטת האצטרובל ממוקמת באזור גחון הזנב ביותר בין שתי ההמיספרות פשוט המקוריות ל-tהוא המוח הקטן (הפסקת אצטרובל), והוא ממש מתחת או על פני השטח של קרומי המוח מעל הקוליקולוס. הסרת בלוטת אצטרובל שימוש הראשון ששני מלקחי קצה התכופף קטנים. זה בצבע ורוד כמו הקליפה, אך לעתים קרובות הוא מוקף בשאריות של דם ומערכת כלי דם השיורי מהסרת המוח. 2. הסרת MAV להעיף את המוח על "הפוך" ולהפריד את העורק החולייתי, עורקים קטנים יותר וקרום המכסים את גשר המוח מקרומי המוח וכלי הדם של המוח הקדמי. הסרת המוח הקדמי MAV אז התחילה. זה חשוב להתחיל ventrally בתהליך הנתיחה. העורקים המרכזיים הגדולים של המעגל של ויליס עורקים, מוח אמצעיים (MCA) ועורקים קדמיים הם החזקים ביותר ולשמש "פיגומים" שבו העורקים הקטנים יותר השטחיים וarterioles של pial קרום אז ניתן להסירו מקליפה עם השארית של קרומי המוח. ראה סקירה של 7 מ 'לScreminייצוגים חזותיים עפרות ופרטים של מערכת כלי הדם במוח. המשטח החל עם או אונה, השתמש במלקחי הקצה התכופף הקטנים לנתק את עורק התקשורת האחורי רק האחורי לצומת עורק התרדמה הפנימית. לכן, הפרדת עצי העורקים הקדמיים ואחוריים יותר של המוח הקדמי. חזור על אותו התהליך לאונה הנגדית. היא החזיקה את MCA והעורק הקדמי עם המלקחיים, למשוך בעדינות בכיוון קדמי-הגבה כך שMAV כיסוי הקדמי קליפת הגחון (אגסים, גבשושי הרחה) הוא הרים מעל ומסביב את מערכת חוש הריח. זה מסיר הרבה מMAV מכסה את קליפת המוח הקדמית (cingulated והקפה). הפעל את המוח ב45-90 זווית ° לצלחת פטרי. האזורים הרוחביים, הקדמיים יותר של MAV מקיף את אזורי קליפה לרוחב (מבודד פרטניים, חושיים משני וקליפת המוח השמיעתי) יכולים להשתחרר מקליפת המוח על ידי האחיזה בMCA והנלווה arteries ועדינות מושך dorsally לאורך הקליפה. במידת צורך, את קצות המלקחיים ניתן להשתמש כדי להרים ולשחרר את העורקים הראשיים מהקליפה במהלך נתיחה. עכשיו להסיר את האזורים לרוחב אחוריים יותר של MAV. (שים לב, הדרך הטובה ביותר היא לעבור מכדור אחד למשנו במהלך תהליך קצירה זו כדי להבטיח שMAV נשאר קר והתייבשות. כמו כן, אם בהתנגדות לשחרר MAV מהקליפה הוא נתקל במתג אחד לאונת האונה הנגדית באופן זמני ולאחר מכן לחזור לחץ הכדור המקורי מאוחר יותר.) כדי להסיר את אזורי הגב ביותר של MAV סביבה החושית הראשונית וקליפת המוח המוטורי הופכת את הצד הגבה מוח (יחסית לחלקו התחתון של צלחת פטרי). לבסוף לשחרר MAV ממוח, השתמש בקצות המלקחיים לאורך סינוס sagital. חלק זה בנקטף MAV יכול להיות כל זמן באופן זמני במלח קר כקרח עד בדיקה וניתוח למועד מאוחר יותר או קפוא עיבוד. לעתים קרובותMAV מכסה את האזורים האחוריים / זנב ביותר של קליפת המוח (הקורטקס שמיעתי entorhinal, חזותי והזנב ביותר) נשאר מחובר לקליפת המוח. הסרתו מוצגת מאוחר יותר בוידאו בעת MAV בין קליפת retrosplenial ומעל כולם את הקוליקולוס גזור. 3. הסרה דמתה עין המקלעת מקם את הצד מגבה המוח ולהחזיק במקום עם המלקחיים הגדולים דחפו את המלקחיים הקטנים למטה דרך קו האמצע בין שני חצאים המוח ולאחר מכן השתמשתי בקצוות לנקב דרך כפיס המוח וקליפת מוח קורפוס (≈ -3.3 מ"מ מגבחת) לתוך חלק העליון של קו האמצע של ההיפוקמפוס. השתמש במלקחיים כדי למשוך את הקליפה עם כפיס מוח מן ההיפוקמפוס ומחץ הגבה, החשיפה מרבית של חדר הצדדי. המקלעת דמתה העין יכולה להיות ממוקמת וזוהתה על ידי הקו האדום הגלי תיחום העורק המרכזי הפועל לאורכה. השתמש בשני הקצוות של את המלקחיים לחטט הקירות הצדדיים של ven 3tricle ולהגדיל אותו בסוף הזנב ביותר (≈ -4.3 מ"מ מגבחת 8). שימוש במלקחיים הקטנים, למשוך הקצה הזה של המקלעת דמתה עין החופשית. ואז ללכת לאזור מאוד הקדמי בין המחיצה וcaudate / putamen (המידה המקורית ביותר, 1.6 המ"מ ≈ מגבחת) ועם מלקחי הגדלת סעיף זה של חדר ומושכים את המקלעת דמתה עין החופשית. בצע את אותו התהליך באונה הנגדית כדי לקבל את המקלעת דמתה העין שנותרה השנייה. שוב רקמה זו יכולה להיות כל זמן באופן זמני במלח קר כקרח עד בדיקה וניתוח או מוקפא לשימוש מאוחר יותר לעיבוד. 4. הסרת MAV שנותר בחלל 3 rd שמעליה התלמוס והקוליקולוס כמו גם שעל אזורי caudal יותר של קליפת המוח, כולל Retrosplenial, שמיעתיים והחזותי Cortex הסר את כל ההיפוקמפוס משני חצי החושפים את MAV מעל התלמוס והקוליקולוס. ההסרהחלק זה של MAV הוא הרבה פחות קשה מאשר הסרת MAV על הקליפה. משוך חלק זה של MAV החופשי על ידי אחיזה בכלי הדם הגדולים שכיסה את החלק הקדמי של התלמוס ועדינות מושכת caudally. vasculature זה מחובר לרשת collicular לעיל ומספק דם ליפוקמפוס הגבה ורשת התלמוס הגבה. משוך אותו משם ובהדרגה caudally חופשי רשת supracollicular עד שמגיע המנות האחרונות של מערכת כלי דם עורקי מעגל הזנב. בשלב זה, עוד יש להקפיד להסיר כל MAV גחון אחורי שנותר על פני השטח של retrosplenial הפרטני, השמיעתיים ראשוני וקליפת המוח החזותית. כמו בסעיף השני של MAV מכסה את החלקים קדמיים יותר של קליפת המוח, רקמה זו יכולה להיות כל זמן באופן זמני במלח קר כקרח עד בדיקה וניתוח למועד מאוחר יותר או קפוא עיבוד. כל MAV הגחון האחורי שנותר נקטף עם סעיף MAV השני יש להסירד הוסיף לסעיף הראשון הגזור MAV מכסה את הקליפה אם הם להיות מנותחים בנפרד. 5. נציג תוצאות כאשר הנתיחה מבוצעת כהלכה, רקמות MAV תוצאה צריכות להיות בשתי ישויות שלמות במשקל כ 35-45 מ"ג כולל. MAV נתח תחילה מקיף את רוב הקליפה צריך לשקול על 25 מ"ג וMAV מכסה את התלמוס, הקוליקולוס וקליפה עורפית צריכים לשקול על 15 מ"ג. זה צריך להיות מעט ורוד בצבע מהדם שיורית בכלי הדם. דמו עין המקלעת הבילטרלי נקטף צריך להיות בשתי דגימות רקמה שלמות עם כל 1 ל 2 גרם במשקל. למרות שניתן להסיר את עודפי מים מMAV לפני האחסון או עיבוד באמצעות נייר טישו כמו זה ששמש בניקוי עדשה, כדי למנוע אובדן רקמות שזה לא רעיון טוב כדי להסיר עודפי מים הגזורים דמה עין המקלעת. איור 1 נוצר עבור השוואת profil ביטוי es בשלושה אזורים (סטריאטום, הקודקודית קליפה וMAV) בתנאים מבוקרים, באמצעות Agilent-014879 הגנום 4x44K 60mer מערכי Rat שלמים oligonucleotide (G4131F, Agilent Technologies, פאלו אלטו, קליפורניה; NCBI GEO # GPL7294 הצטרפות; GSE23093 וGSE29733 שנמצאים ב מאגר NCBI GEO). שני המגרשים בדמות ציורי להראות ביטוי ב1) סטריאטום בהשוואה לקליפת המוח הקודקודית ו2) MAV השוואה לקליפת המוח הקודקודית. ברור שסטריאטום וקליפת המוח הקודקודית הם קשור הרבה יותר קרוב זה לזה מאשר MAV. נתוני ההשוואה דמתה עין המקלעת עם MAV יוצגו בפרסום עתידי. עם זאת, סביר להניח כי את פרופילי הביטוי בMAV ודמה עין המקלעת קשורים באופן הדוק יותר לזה מאשר לסטריאטום וקליפת המוח הקודקודית. איור 2 מראה את תגובת הפרש ביטוי הגנים ליפרתרמיה (EIH) לעומת AMPH בMAV השוואה כדי לשלוט ואחד את השני. תוכן "> ביטוי הגנים של יותר מ -11,000 גנים עם סמלים רשמיים NCBI גן בMAV של פקד חיים היה בהשוואה לאלה שנרשמו בסטריאטום וקליפת המוח הקודקודית. במהלך 2000 של הגנים הללו היה ביטוי 2.5 מתקפל או יותר שונה בMAV בהשוואה לשתי רקמות עצביות העשירות, ו550 גנים היו הבדל גדול יותר 10-לקפל בביטוי. מעט יותר מ 40% (253) מהם היו גנים עם ביטוי ירידה של 10-לקפל או יותר בMAV והיו קשורים ל תפקוד עצבי. היו 343 גנים עם מעל 10 ביטוי מתקפל או גדול יותר בהשוואה לקליפת MAV הקודקודית וסטריאטום. זו רשימה של גנים שמשה כנקודת התחלה שבה כדי לקבוע גנים עם העשרה גבוהה מאוד בMAV. טבלה 1 מפרט את הגנים עם יותר מ 15 ביטוי מתקפל בMAV השוואה לקליפת מוח הקודקודית וסטריאטום ומסווג אותם ביחס לתפקוד. רבים מהגנים האלה קשורים למערכת כלי הדם ו / או מערכת החיסונית. T אלהypes של גנים צריך להיות מועשר כ 5 – עד 10 – לקיפול בגלל כלי הדם המוגברים עצמו ודם הווה בתוכו. עם זאת, גם לגנים עם פונקציות כלליות של כלי דם ידועות, עלייה מעל 15-לקפל מציינת העשרה בMAV. היו גם מספר הגנים עם שינויי קיפול גדולים מאוד שהיו; 1) חלבונים תאיים מטריצה ​​(שאינה קשור באופן ספציפי לכלי דם), 2) מובילים מומסים ו3) שומנים בדם וחילוף חומרים של חומצה רטינואית. כמעטי צמיחה טובה, וגן ההתמיינות או גורמי שעתוק נמצאו. איור 1. השוואה של ביטוי הגנים בMAV עם קליפת מוח הקודקודית וסטריאטום. עלילת געש השוואה בין רמות ביטוי הגנים של הקודקודית הקליפה וסטריאטום (חלקה עליונה) והקודקודית הקליפה וMAV (חלקה תחתונה). הסמלים האדומים מציינים את הגנים שbetwe שונה באופן משמעותיאזורי en בp <0.05 ויש להם ביטוי הפרש 1.5 מתקפל או גדול יותר בין האזורים. הסמלים השחורים מייצגים גנים שלא באופן משמעותי אל שונים בין האזורים (p> 0.05) ופחות מ 1.5-קיפול שונה בביטוי. הסמלים והרודים מצביעים גנים עם פחות מ 1.5-הבדל של פי ביטוי אבל באופן מובהק סטטיסטי שונים בp <0.05. הסמלים הצהובים לזהות גנים שיש להם ביטוי 1.5 מתקפל או גדול אבל השינוי הזה אינו משמעותי מבחינה סטטיסטית בp <0.05. סימני קצור אמפטמין AMPH היפרתרמיה EIH סביבה מושרה קרומי מוח וכלי דם מוחיים MAV המשויך נורמת normothermic שולט איור 2. השפעות של היפרתרמיה ואמפטמין על ביטוי גנים בMAV. חלקות Volcano השוואהרמות ביטוי הגנים בMAV לאחר מלוח, EIH או AMPH בנקודת זמן השעות 3. הסמלים האדומים מציינים את הגנים שלדעתה יהיה שונה באופן משמעותי ואילו נקודות / עיגולים השחורות מייצגות גנים שלא באופן משמעותי אל שונים בין האזורים. ניתוח סטטיסטי נוסף שמש כדי לבדוק באיזה ביטוי הבדלים בין שליטה וטיפולים היו למעשה משמעותי מבחינה סטטיסטית. ביטוי מוח ביטוי MAV סמלי NCBI Gene רקמה ספציפית או פונקציה מדווחת (הים) > 50-לקפל Anxa2, Col8a1, דז, Esm1, Glycam1, KL, Lect1, Lepr, לום, Myh11, Ogn, Tagln, Thbs2, Tnnt2 Vasculature ולב > 50-לקפל Ccl19, Cd74, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-BB, RT1-Da מערכת חיסונית > 50-לקפל Adh1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 חומצה רטינואית עיבוד שומנים > 50-לקפל Cdh1, Col3a1, Col1a2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DcN, Emp3, Gpc3, Nupr1, OMD, Slamf9 Pcolce, Tmem27, Tspan8 מטריקס ותאי תאי צומת תאיים > 50-לקפל Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, TTR יון & הומאוסטזה המומסת > 50-לקפל Alx3, Cdkn1c, Foxc2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, Osr1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 פיתוח והסדרת תמלול > 50-לקפל Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 לא ידוע ושונים 30-50-לקפל </td> Anxa1, Angpt2, C6, Gjb2, Ptgis, Thbd, Timp1 Vasculature ולב 30-50-לקפל Casp12, Ccl2, Ccr1, Cd14, Cxcl10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 מערכת חיסונית 30-50-לקפל Col6a3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, Mgp, Nid2 מטריקס ותאי תאי צומת תאיים 30-50-לקפל Cp, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 יון & הומאוסטזיס מומס 30-50-לקפל CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 חומצה רטינואית עיבוד שומנים 30-50-לקפל Bmp6, Casp12, Dab2, Folr1, IGF2, Msx1, Tbx18, Twist1, wnt5b פיתוח והסדרת תמלול 30-50-לקפל Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim לא ידוע ושונים 15-30-לקפל Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, קס,, liz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip , Vamp5, Vtn Vasculature ולב 15-30-לקפל עדה, Bst2, Ccl6, Cd40, Cd68, Ctsc, DAP, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, MSc, Nfatc4, RT1-DB1, Serpinb1a, Tir4, Tubb6 מערכת חיסונית 15-30-לקפל Adamtsl4, Col1a1, Crb3, DPT, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, Timp3 מטריקס ותאי תאי צומת תאיים 15-30-לקפל Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9A2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 יון & הומאוסטזיס מומס 15-30-לקפל Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, Rbp4 חומצה רטינואית עיבוד שומנים 15-30-לקפל Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 פיתוח והסדרת תמלול 15-30-לקפל Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, Cyp1b1, DSE, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, השוואות והצעת רכישה, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 לא ידוע ושונים * גנים נכללים בטבלה חייבים להיות גם הביטוי מעל יותר מ 15-לקפל בסטריאטום וparietאל קליפת המוח ו5-לקפל מעל רמות הרקע. נמוך מבין שני יחסים (MAV / סטריאטום או MAV / קליפת מוח הקודקודית) לכל גן שמש לקיבוץ. בגנים נמצאים בתאי אנדותל, אלא גם עשוי לשחק תפקיד מרכזי בתיווך תגובות חיסוניות. טבלת 1. גנים בעלי * 15-לקפל או ביטוי מוגבר יותר בהשוואה לMAV סטריאטום וקליפת המוח הקודקודית.