A وصف البصرية في تشريح الأوعية الدموية السطحية والسحايا الدماغي المقترن والضفيرة المشيمية من دماغ الفئران

على الرغم من أن لا يظهر في شريط الفيديو، وقد تم أولا إعطاء الفئران جرعة زائدة من 300 ملغ / كغ من بنتوباربيتال، مما أدى إلى التخدير في أقل من 3 دقائق، ثم قتل بقطع الرأس. وكانت أدمغتهم ثم بسرعة ولكن بعناية من إزالة الجمجمة وبرود في الجليد الباردة ملحي لمدة 5 دقائق. من المهم السماح لتبريد الدماغ هذا القدر من الوقت قبل تشريح MAV بحيث يمكن فصل MAV من سطح القشرة (أعلى طبقة I). ثم وضعت في الدماغ في الجزء السفلي من طبق بتري الزجاج يستريح على الجليد التي كانت مليئة (1 سم العميق) من الجليد الباردة ملحي أو 0.1 الفوسفات مخزنة المالحة الصوديوم M الرقم الهيدروجيني = 7.4. ويتم كل تشريح الدماغ مع بالنسبة للجزء الأكبر مغمورة في المياه المالحة. 1. إزالة الغدة الصنوبرية وضع ما يصل الدماغ الجانب الظهري (نسبة إلى الجزء السفلي من طبق بيتري). يقع الغدة الصنوبرية في المنطقة البطنية أكثر الذيلية بين نصفي الكرة الأرضية منقاري فقط لرانه المخيخ (عطلة الصنوبرية)، وأقل فقط أو على سطح السحايا خلال الأكيمية. إزالة الغدة الصنوبرية باستخدام الأولين طرف بنت صغيرة ملقط. ومن ردي اللون مثل القشرة ولكن في كثير من الأحيان ويحيط بقايا الدم والأوعية الدموية المتبقية من إزالة الدماغ. 2. إزالة MAV الوجه الدماغ على "رأسا على عقب" وفصل الشريان الفقري، أصغر الأوعية الدموية، والتي تغطي بونس السحايا السحايا من الأوعية الدموية والدماغ الأمامي لل. وبدأت بعد ذلك إزالة MAV الدماغ الأمامي. من المهم أن تبدأ بطنيا في عملية التشريح. والشرايين الكبيرة الرئيسية للدائرة ويليس والشرايين الدماغية الأوسط (MCA) والشرايين الأمامية هي الأقوى وتكون بمثابة "السقالات" الذي أصغر الشرايين السطحية والشرايين من حنوني ويمكن بعد ذلك يتم إزالة غشاء من القشرة مع ما تبقى من السحايا. انظر استعراض Scremin 7 لمخام تمثيل مرئي وتفاصيل الأوعية الدموية السطحية الدماغي. بدءا إما نصف الكرة، استخدم تلميح بنت صغيرة ملقط لقطع الشريان الخلفي التواصل الخلفي فقط لالمنعطف السباتي الداخلي. وهكذا، فصل الأشجار أكثر الأمامي والخلفي من الدماغ الأمامي الشرايين. كرر نفس العملية لنصف الكرة الأرضية المقابل. التي تجتاح MCA والشريان الأمامي مع ملقط، وسحب بلطف في اتجاه الأمامي الظهري بحيث يتم رفع MAV تغطي القشرة الأمامية البطنية (الكمثرية، الحديبة الشمية) على وحول المسالك حاسة الشم. هذا يزيل الكثير من MAV تغطي القشرة الأمامية (الحزامي والمداري). بدوره الدماغ بزاوية ° 45 ما بين 90 و طبق بيتري. يمكن تحرير الجانبي، المناطق الأكثر الأمامي من MAV المحيطة المناطق الجانبية القشرية (الانعزالية الحبيبية، الحسية الجسدية الثانوية والقشرة السمعية) من القشرة التي تجتاح بواسطة MCA وARTER المرتبطة بهاوسحب بلطف المنشأ ظهريا على طول القشرة. إذا لزم الأمر، يمكن استخدام نهايات ملقط لرفع وتحرير الشرايين الرئيسية من القشرة خلال تشريح. الآن إزالة المناطق الأكثر الخلفي الجانبي للMAV. (ملاحظة، فمن الأفضل للتبديل من نصف الكرة إلى أخرى أثناء هذه العملية الحصاد لضمان أن يظل MAV الباردة ورطب. أيضا، إذا تم مصادفة المقاومة في تحرير MAV من القشرة على مفتاح واحد إلى نصف الكرة نصف الكرة المقابل مؤقتا ثم انتقل مرة أخرى إلى نصف الكرة الأصلية في وقت لاحق.) لإزالة أكثر المناطق الظهرية للMAV المحيطة الحسية الجسدية الأولية والقشرة الحركية تحويل ما يصل الدماغ الجانب الظهري (نسبة إلى الجزء السفلي من طبق بيتري). لتحرير أخيرا MAV من الدماغ، استخدم طرفي ملقط على طول الجيب sagital. ويمكن هذا الجزء المقطوع من MAV الاحتفاظ بشكل مؤقت في المياه المالحة الباردة الجليد حتى الاختبار والتحليل أو تجميد للتجهيز في وقت لاحق. غالباوMAV تغطي أكثر المناطق الخلفية / الذيلية من القشرة (القشور الأنفية الداخلية السمعية والبصرية والذيلية أكثر) لا تزال تعلق على القشرة. يظهر زواله في وقت لاحق في الفيديو عندما يتم تشريح MAV بين القشرة وخلف الطحال تغمر الأكيمية. 3. إزالة الضفيرة المشيمية موقف الجانب الظهري الدماغ صعودا وعقد في مكان مع أكبر ملقط ملقط ادفع أصغر أسفل خط الوسط من خلال نصفي الكرة الأرضية وبين استخدام ثم ينتهي إلى ثقب من خلال الثفني القشرة والإحضار (-3،3 ≈ مم من bregma) في الجزء العلوي من خط الوسط من قرن آمون. استخدام ملقط لسحب القشرة مع الثفني بعيدا عن الحاجز الحصين الظهرية و، وفضح معظم البطين الجانبي. يمكن أن يكون موجودا في الضفيرة المشيمية والتي حددها خط أحمر مائج ترسيم الشريان الرئيسي الذي يمتد طوله. استخدام طرفي ملقط لابعاد الجدران الجانبية للفين 3tricle وتكبير عليه في نهاية معظم الذيلية (-4،3 ≈ مم من bregma 8). باستخدام ملقط صغير، وسحب هذه الغاية الضفيرة المشيمية للالحرة. ثم انتقل إلى المنطقة الأمامية جدا بين الحاجز والمذنبة / putamen (مدى أكثر منقاري، ≈ +1.6 ملم من Bregma) ومع ملقط تكبير هذا الجزء من البطين وسحب المشيمية الضفيرة مجانا. تنفيذ الإجراء نفسه على نصف الكرة المقابل للحصول على ثاني المتبقية الضفيرة المشيمية. يمكن مرة أخرى أن هذا النسيج الاحتفاظ بشكل مؤقت في المياه المالحة الباردة الجليد حتى الاختبار والتحليل أو تجميد للتجهيز في وقت لاحق. 4. إزالة MAV المتبقية في البطين الثالث 3 المغطي المهاد والأكيمية، وكذلك على أن المناطق الأكثر الذيل من القشرة بما في ذلك خلف الطحال، والقشرة البصرية السمعية إزالة الحصين كامل من نصفي الكرة الأرضية تعريض MAV أكثر من المهاد والأكيمية. إزالةهذا الجزء من MAV هو أقل بكثير من الصعب إزالة القشرة MAV أكثر. سحب هذا الجزء من MAV مجانا من أكبر استيعاب الأوعية الدموية التي تغمر الجزء الأمامي من المهاد وسحب بلطف نحو caudally. ويرتبط هذا الأوعية الدموية لشبكة أكيمي أعلاه وتجهيز الدم إلى الحصين الظهرية والظهرية شبكة المهاد. تسحبه بعيدا نحو caudally وخالية تدريجيا حتى وصلت شبكة supracollicular الأجزاء الأخيرة من الأوعية الدموية الشريانية دائرة الذيلية. عند هذه النقطة، يجب اتخاذ المزيد من الرعاية لإزالة أي المتبقية MAV بطني الخلفي على سطح محبب خلف الطحال والسمعية البصرية الأولية والقشور. كما هو الحال مع غيرها من الفرع MAV تغطي الأجزاء الأمامية أكثر من القشرة، يمكن هذا النسيج الاحتفاظ بشكل مؤقت في المياه المالحة الباردة الجليد حتى الاختبار والتحليل أو تجميد للتجهيز في وقت لاحق. يجب إزالة أي المتبقية MAV بطني الخلفي المقطوع مع هذا القسم MAV الثانية هيوأضاف د الى الفئة الاولى MAV تشريح تغطي القشرة إذا كانت لتحليلها بشكل منفصل. 5. ممثل النتائج عند تنفيذ تشريح بشكل صحيح، يجب أن يكون الناتج الأنسجة MAV في كيانين سليمة وزنها نحو 35 الى 45 المجموع ملغ. وMAV تشريح البداية المحيطة معظم القشرة يجب أن تزن حوالي 25 ملغ وMAV تغطي المهاد، ينبغي الأكيمية والقشرة القذالي تزن حوالي 15 ملغ. ينبغي أن يكون ردي اللون قليلا في من الدم المتبقي في الأوعية الدموية. ينبغي أن الضفيرة المشيمية الثنائية المقطوع يكون في اثنين من عينات الأنسجة سليمة مع كل ملغ 1-2 وزنها. على الرغم من أن يمكن إزالة الماء الزائد من MAV قبل التخزين أو المعالجة باستخدام المناديل الورقية مثل تلك المستخدمة في تنظيف العدسة، لتجنب فقدان الأنسجة أنها ليست فكرة جيدة لإزالة المياه الزائدة من الضفيرة المشيمية تشريح. الشكل 1 تم إنشاؤها ل مقارنة PROFIL التعبير وفاق في ثلاث مناطق (المخطط، القشرة الجدارية وMAV) في ظل ظروف سيطرة على استخدام اجيلنت-014879 الجامع الجرذ الجينوم 4x44K 60mer صفائف قليل النوكليوتيد (G4131F، اجيلنت تكنولوجيز، بالو ألتو، CA، NCBI GEO انضمام # GPL7294؛ GSE23093 وGSE29733 التي تكون موجودة في مستودع GEO NCBI). قطعتي الأرض في الشكل تظهر بالصور التعبير في 1) والمخطط مقارنة مع القشرة الجدارية و 2) MAV مقارنة مع القشرة الجدارية. من الواضح أن المخطط والقشرة الجدارية هي أكثر ارتباطا ببعضها البعض من MAV. وستعرض البيانات مقارنة الضفيرة المشيمية مع MAV في منشور المستقبل. ومع ذلك، فمن المرجح أن أكثر ارتباطا ملامح التعبير في MAV والضفيرة المشيمية لبعضها البعض مما هي عليه في المخطط والقشرة الجدارية. ويبين الشكل 2 التعبير الجيني استجابة لارتفاع الحرارة التفاضلية (ايه) مقابل AMPH في MAV مقارنة للتحكم وبعضها البعض. المحتوى "> ومقارنة التعبير الجيني للجينات أكثر من 11،000 مع مسؤول رموز الجينات NCBI في MAV من الحيوانات التحكم لتلك المسجلة في المخطط والقشرة الجدارية. أكثر من 2000 من هذه الجينات كان تعبير 2.5 أضعاف أو أكثر مختلفة في MAV بالمقارنة مع الأنسجة العصبية الغنية اثنين، و 550 الجينات كان الفرق أكبر بمقدار 10 أضعاف في التعبير. كانت قليلا أكثر من 40٪ (253) من هذه الجينات مع انخفاض التعبير أضعاف-10 أو أكثر في MAV وكانت مرتبطة وظيفة الخلايا العصبية. كانت هناك 343 الجينات مع أكثر من 10 أضعاف التعبير أو أكبر في MAV مقارنة القشرة الجدارية والمخطط. وقد استخدم هذا الجدول قائمة من الجينات كنقطة انطلاق لتحديد التي الجينات مع لتخصيب عالية جدا في MAV. 1 قائمة الجينات مع أكبر من التعبير 15-أضعاف في MAV مقارنة القشرة الجدارية والمخطط ويصنفها فيما يتعلق وظيفة. ويتصل العديد من هذه الجينات إلى الأوعية الدموية و / أو الجهاز المناعي، وهذه روينبغي إثراء ypes من الجينات حوالي 5 – إلى 10 – إلى أضعاف بسبب زيادة الأوعية الدموية والدم نفسها موجودة في ذلك. ولكن، حتى مع وظائف الجينات عن الأوعية الدموية المعروفة عامة، بزيادة أعلاه أضعاف-15 يشير إلى تخصيب اليورانيوم في MAV. كانت هناك أيضا أعداد من الجينات مع تغييرات كبيرة جدا أضعاف التي كانت: 1) البروتينات المصفوفة خارج الخلية (لا تتصل بوجه خاص الأوعية الدموية)، 2) النقل والمذاب 3) الدهون واستقلاب حمض الريتينويك. كما تم العثور أيضا، النمو والقليلة التمايز الجينات أو عوامل النسخ. الشكل 1. مقارنة بين التعبير الجيني في MAV مع القشرة الجدارية والمخطط. مؤامرة بركان مقارنة مستويات التعبير الجيني من القشرة الجدارية والمخطط (مخطط الأعلى) والقشرة الجدارية وMAV (مؤامرة أسفل). رموز الأحمر دلالة على الجينات التي هي مختلفة إلى حد كبير betweEN المناطق في ع <0.05 ولها التعبير الفرق 1.5 أضعاف أو أكثر بين المناطق. رموز سوداء تمثل الجينات التي لا تختلف اختلافا كبيرا بين المناطق (P> 0.05) وأقل من 1.5 أضعاف اختلاف في التعبير. رموز تشير إلى الجينات الوردي مع أقل من 1.5 أضعاف الفرق في التعبير ولكنها مختلفة بشكل ملحوظ إحصائيا عند 0.05 <P. رموز الصفراء تحديد الجينات التي لديها 1.5 أضعاف التعبير أو أكبر ولكن هذا التغيير ليس ذات دلالة إحصائية عند p <0.05. الاختصارات AMPH المنشطات ايه للبيئة الناجم عن ارتفاع الحرارة MAV السحايا الدماغي وما يرتبط بها من الأوعية الدموية القاعدة تسيطر سوي الحرارة الشكل 2. بركان المؤامرات آثار ارتفاع الحرارة والأمفيتامين على التعبير الجيني في MAV. مقارنةمستويات التعبير الجيني في MAV بعد المالحة، أو AMPH ايه في نقطة الوقت ساعة 3. رموز الأحمر دلالة على الجينات التي تعتبر أن تكون مختلفة بشكل كبير في حين أن النقاط السوداء / دوائر تمثل الجينات التي لا تختلف اختلافا كبيرا بين المناطق. تم استخدام التحليل الإحصائي إضافية للتحقق من الفروق بين التعبير التي تحكم والعلاجات هي في الواقع ذات دلالة إحصائية. MAV التعبير التعبير الدماغ NCBI الرموز جين خصوصية الأنسجة أو وظيفة ذكرت (ق) > 50 أضعاف Anxa2 ل، Col8a1، ديس، Esm1، Glycam1، كوالا لمبور ل، Lect1، Lepr، لوم، Myh11، Ogn، Tagln، Thbs2، Tnnt2 الأوعية الدموية والقلب > 50 أضعاف Ccl19، Cd74 ل، Defb1، Lrrc21، Mgl1، Mrc1، Msln، ررa2g5، Prg4، RT1-BB، RT1 دا الجهاز المناعي > 50 أضعاف Adh1، Aebp1، Aldh1a2، Gstm2 حمض الريتينويك وتصنيع الدهون > 50 أضعاف Cdh1، Col3a1، Col1a2، Colec12، Cpxm2، CPZ، دار، Emp3، Gpc3، Nupr1، OMD، Pcolce Slamf9، Tmem27، Tspan8 مصفوفة خارج الخلية والخلية خلية تقاطعات > 50 أضعاف Aqp1، Asgr1، Kcnj13، Slc5a5، Slc6a13، Slc6a20، Slc22a6، Sned1، فريق العمل المعني بالموارد والتوازن الأيوني المذاب > 50 أضعاف Alx3، Cdkn1c، Foxc2، Igfbp2، Ifitm1، Ifitm2، Nkx6-1، OSR1، Prrx2، Sfrp1، Tbx15. Upk1b، Wisp2، Wnt6 تنمية وتنظيم النسخ > 50 أضعاف Gpha2، Mfap5، Mpzl2 Plac8، Scgb1c1، Sostdc1، Steap1 غير معروف ومتنوعة 30 حتي 50 أضعاف </TD> Anxa1 ل، Angpt2، C6 ل، Gjb2، Ptgis، Thbd، Timp1 الأوعية الدموية والقلب 30 حتي 50 أضعاف Casp12، CCL2، Ccr1، CD14، Cxcl10، Ifitm3، ​​Klra5، Lgals1، Lgals3، Ms4a4a، Ms4a7، Plscr1، Spp1، Xcl1 الجهاز المناعي 30 حتي 50 أضعاف Col6a3، Cpxm1، Efemp1، FMOD، مجان، Nid2 مصفوفة خارج الخلية والخلية خلية تقاطعات 30 حتي 50 أضعاف حزب المحافظين، Cubn، Gcgr، S100a6، Scn7a، SCT، Slc4a5، Slc16a11، Slco1a5 والتوازن الأيوني المذاب 30 حتي 50 أضعاف قدم مكعبة يوميا، Ch25h، Crabp2، Rarres2 حمض الريتينويك وتصنيع الدهون 30 حتي 50 أضعاف Bmp6، Casp12، Dab2، Folr1، IGF2، Msx1، Tbx18، Twist1، Wnt5b تنمية وتنظيم النسخ 30 حتي 50 أضعاف Cela3b، Cln6، C1qtnf7، Copz2، Dhrs7c، Gng11، Prss23، Srpx، فيم غير معروف ومتنوعة 15 إلى أضعاف-30 ADM، Angpt1، Angptl2، BGN، Cklf ل، Cnn1، Cox8h، Ctsk، F13a1، Gja5، Klf4، وكس، Lyz، Myl9، Procr، Pros1، RT1 با، Serpinb10، Serping1، Serpinf1، Tgm2، Tnmd، Trim63، Txnip و، Vamp5، VTN الأوعية الدموية والقلب 15 إلى أضعاف-30 إدا، Bst2، Ccl6، CD40، Cd68، Ctsc، داب، Faim3، Fkbp9، Fxyd5، Fmo1، Glipr1، Ier3، Ifi47، Igsf6، ماجستير، Nfatc4، RT1-DB1، Serpinb1a، Tir4، Tubb6 الجهاز المناعي 15 إلى أضعاف-30 Adamtsl4، Col1a1، Crb3، DPT، Egfl3، Fbn1، Fbln1، Fbln5، FN1، Itgb4، Lama2، Lgals3bp، Loxl1، Mfap4، Mmp14، Mmp23، Ppic، Serpinh1، Timp3 مصفوفة خارج الخلية والخلية خلية تقاطعات 15 إلى أضعاف-30 Cybrd1، Selenbp1، Slc2a4، Slc9A2، Slc13a3، Slc16a4، Slc22a8، Slc22a18 والتوازن الأيوني المذاب 15 إلى أضعاف-30 Agpat2، Bdh2، Cyp26b1، Lpar3، Ltb4dh، Olr1، Pon3، Rbp1، Rbp4 حمض الريتينويك وتصنيع الدهون 15 إلى أضعاف-30 Atf3، Dkk4، Eya2، Ifitm7، Ltbp1، Mustn1، Nr2f2، Ptrf، Sphk1، Tgfbi، Tcfap2b Tcea3، Wnt2b، Wnt5a، Zic1 تنمية وتنظيم النسخ 15 إلى أضعاف-30 Adamts12، Adamtsl3، C1r، Crispld2، Crygn، Cyp1b1، DSE، Enpep، Enpp2، Epn3، Flna، Fmo3، Gnmt، Gprc5c، Hspb1، Klc3، Krt18، Krt19، MDK، Mesp1، Ms4a6a، Ms4a6b، Ms4a11، Net1، Pdlim2، Phactr2، Plp2، Ppp1r3b، Pqlc3، Rin3، Spag11، Sult1a1، Tmem106a، Wfikkn2 غير معروف ومتنوعة * يجب أن الجينات المدرجة في الجدول أن تكون تعبيرا أكثر من 15 أضعاف أعلاه في المخطط وparietآل القشرة و 5 أضعاف فوق المستويات الطبيعية. وكان يستخدم أقل من نسب اثنين (MAV / أو المخطط MAV / القشرة الجدارية) لكل جينة للتجميع. تم العثور على الجينات في الخلايا البطانية ولكن أيضا تلعب دورا رئيسيا على الأرجح في التوسط الاستجابات المناعية. الجدول 1. الجينات مع * 15 أضعاف أو أكثر زيادة في التعبير MAV مقارنة المخطط والقشرة الجدارية.