Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit
Summary
Değerlendirilmesinde kullanılacak kilit teknikleri<em> Candida</em> Vajinit deneysel bir hayvan modeli anlatılmaktadır. Yöntemleri, lomber lenf düğümleri drenaj, vajinal örneklerin ve lenfositler hızlı toplama sağlayacaktır. Bu teknikler, kadın alt genital sistem diğer hastalıkların fare modelleri yol açabilir.
Abstract
Vulvovajinal kandidiazis (VVC), Candida türlerinin neden olduğu, aksi takdirde sağlıklı kadınların yaklaşık% 75'i üreme yıl boyunca 18,32-34 etkileyen alt dişi genital sistemin bir mantar enfeksiyonu. Predispozan faktörler, antibiyotik kullanımı, kontrolsüz diyabet ve rahatsızlık üreme hormon düzeyleri gebeliğe bağlı, oral kontraseptif veya hormon replasman tedavileri 33,34 içerir . Tekrarlayan VVC (RVVC) yılda üç veya daha fazla bölüm olarak tanımlanan, hiçbir predispozan faktör 33 ile% 8 kadın için ayrı bir 5 etkiler.
VVC deneysel bir fare modeli kurulmuş ve patogenezi ve Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37 mukozal konak yanıtı çalışma için kullanılan olmuştur. Bu model aynı zamanda, in vivo 13,24 potansiyel antifungal tedaviler test etmek için işe alındı . Modeli hayvanlar opt pseudoestrus bir devlet muhafaza gerektirirolmuş bölgeler Candida kolonizasyonu / infeksiyonu 6,14,23. Bu koşullar altında, haftalar veya aylar için inoküle hayvanlar vajinal mantar yükünün saptanabilir olacaktır. Geçmişte yapılan çalışmalar, immünolojik ve fizyolojik özellikleri 3,16,21 göre hayvan modeli ve insan enfeksiyonu arasındaki son derece yüksek bir paralellik göstermektedir. Farklılıklar Ancak, normal vajinal flora olarak Candida eksikliği ve farelerde nötr bir vajinal pH içerir.
Burada, bir dizi vajinal aşılama, vajinal örneklerin hızlı toplanması, vajinal mantar yükünün değerlendirilmesi ve hücresel çıkarma / izolasyonu için doku hazırlıkları fare vajinit modeli temel yöntemler göstermektedir. Bu vajinal lavaj sıvısı, mantar yükünü, ve drenaj lenf nodu lökosit verim bileşenlerinin temsilcisi sonuçları takip edilmektedir. Anesteziklerin kullanımı ile lavaj örnekleri boyuna değerlendirilmesi için aynı fareler üzerinde birden fazla zaman noktalarında toplananenfeksiyon / kolonizasyon. Ayrıca, tanımlanmış ana koşullar altında immünolojik çalışmalar sağlayan bu model, enfeksiyon başlatmak için herhangi bir immünosupresif ajanlar gerektirir. Son olarak, model ve her iki tekniğin burada potansiyel düşük kadın genital sistem (viral, parazitik, bakteriyel) ve ilgili lokal veya sistemik konak savunmasını diğer bulaşıcı hastalıkları incelemek için metodolojilerin kullanımı doğurabilecek tanıttı.
Protocol
Discussion
Candida vajinit, deneysel bir fare model kurulmuş ve tarihsel olarak son birkaç yıldır kullanılan 3,4,11,13,16,17,19,21,24 antifungal tedaviler test etmek için Candida mukozal konak yanıtının yanı sıra çalışma olmuştur 25,37. Protokoller, burada verimli ve daha az emek-yoğun yöntemleri dahil, ve Candida vajinit en optimize edilmiş bir model sistemleri bugüne kadar açıklanan gibi görünen sundu. Bu teknikler hızlı kantifikasyon vajinal ö…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, R01 AI32556 (NIAID, Ulusal Sağlık Enstitüsü) tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma ayrıca, Louisiana Aşı Merkezi ve Güney Louisiana Louisiana Regents Kurulu tarafından desteklenen Enfeksiyon Hastalıkları Araştırma Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
| Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
| Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
| Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
| Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
| Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
| Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
| Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
| Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
| CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
| Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
| Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
| Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |
References
- Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
- Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis. Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).
- Black, C. A. Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection. Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).
- Black, C. A. Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes. J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).
- Buchannan, D. L. Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification. Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).
- Clemons, K. V. Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity. Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).
- Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection. J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).
- Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses. Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).
- Enjalbert, B. A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections. 77 (11), 4847-4847 (2009).
- Feinen, B. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).
- Fidel, P. L. Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis. Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).
- Fidel, P. L. An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis. Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis. Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).
- Fidel, P. L. A murine model of Candida glabrata vaginitis. J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).
- Fidel, P. L. Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).
- Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D. Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D., Zak, O., Sande, M. . Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. , 741-748 (1999).
- Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans. Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).
- Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance. Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).
- Gill, N. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).
- Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice. Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).
- Hamad, M. Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection. Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).
- LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).
- McGrory, T., Garber, G. E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection. Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).
- Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).
- Nomanbhoy, F. Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity. Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).
- Pietrella, D. A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique. Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).
- Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).
- Saavedra, M. Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis. Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Infect. Dis. 14, S148-S153 (1992).
- Sobel, J. D. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations. Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).
- Song, W. Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice. Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).
- Taylor, B. N. In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus. J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).
- Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis. Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).
- Tirabassi, R. S. A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2. Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).
- Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).
- Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis. J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).
- Yano, J. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).
