Protocolli per l'inoculazione vaginale e Prelievo dei campioni nel modello murino sperimentale di Candida Vaginite
Summary
Tecniche di chiave da utilizzare nella valutazione dei<em> Candida</emVaginite> in un modello animale sperimentale sono descritti. I metodi di permetterà una rapida raccolta di campioni vaginali e dei linfociti nei linfonodi di drenaggio lombare. Queste tecniche potrebbero dare origine a modelli murini di altre malattie del basso tratto genitale femminile.
Abstract
Candidosi vulvovaginale (VVC), causate da Candida specie, è una infezione fungina del basso tratto genitale femminile che colpisce circa il 75% delle donne in buona salute durante i loro anni riproduttivi 18,32-34. I fattori predisponenti comprendono l'uso di antibiotici, il diabete non controllato e disturbi dei livelli degli ormoni riproduttivi dovuti alla gravidanza, contraccettivi orali o terapia ormonale sostitutiva 33,34. VVC ricorrente (RVVC), definita come tre o più episodi l'anno, colpisce un separato da 5 a 8% delle donne senza fattori predisponenti 33.
Un modello murino sperimentale di VVC è stato istituito e utilizzato per studiare la patogenesi e la risposta dell'ospite mucose da Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37. Questo modello è stato utilizzato per testare potenziali terapie antifungine in vivo 13,24. Il modello prevede che gli animali sono mantenuti in uno stato di optare per pseudoestrusIMAL Candida colonizzazione / infezione 6,14,23. In tali condizioni, gli animali vaccinati avranno rilevabili vaginale carica fungina per settimane o mesi. Studi precedenti mostrano un parallelo estremamente elevata tra il modello animale e infezione umana rispetto alla proprietà immunologiche e fisiologiche 3,16,21. Le differenze, tuttavia, sono la mancanza di Candida come normale flora vaginale e un pH neutro vaginale nei topi.
Qui, dimostrano una serie di metodi chiave del modello vaginite mouse che includono l'inoculazione vaginale, la raccolta rapida di campioni vaginali, la valutazione del peso vaginale da funghi, e preparati per l'estrazione dei tessuti cellulari / isolamento. Questo è seguito da risultati rappresentativi per i componenti del liquido di lavaggio vaginale, carica fungina e drenaggio linfatico rendimenti dei leucociti nodo. Con l'uso degli anestetici, i campioni di lavaggio possono essere prelevati in punti più tempo sui topi stessi per la valutazione longitudinaleinfezione / colonizzazione. Inoltre, questo modello non necessita di farmaci immunosoppressori per avviare l'infezione, permettendo studi immunologici in condizioni definite serie. Infine, il modello e ogni tecnica introdotta qui potrebbe potenzialmente dar luogo ad utilizzare le metodologie per esaminare altre malattie infettive del basso tratto genitale femminile (batteriche, parassitarie, virali) e le rispettive difese dell'ospite locale o sistemica.
Protocol
Discussion
Un modello murino sperimentale di vaginite da Candida è stata stabilita e storicamente usato per gli ultimi decenni a studiare la risposta mucosale ospite Candida, nonché per testare le terapie antimicotiche 3,4,11,13,16,17,19,21,24, 25,37. I protocolli presentati qui incorporare efficiente e metodi meno alta intensità di lavoro, e sembrano essere uno dei sistemi modello più ottimizzata di Candida vaginite descritto fino ad oggi. Queste tecniche consentono la quantificazione rap…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato da R01 AI32556 (NIAID, National Institute of Health). Questo lavoro è stato sostenuto in parte dalla Louisiana vaccino Centro e Sud della Louisiana Istituto di ricerca sulle malattie infettive promossa dal Consiglio dei Reggenti della Louisiana.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Female CBA/J mice | Charles River Laboratories | 01C38 | 5-6 weeks of age |
| Candida albicans (3153A) | National Collection of Pathogenic Fungi, UK | NCPF3153 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547 | Does not need to be pre-sterilized before use |
| Β-estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 | 0.1-0.5mg in sesame oil |
| Phytone peptone | Becton Dickinson | 211906 | Supplement with 0.1% glucose |
| Trypan blue solution | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Sabouraud dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | |
| Collagenase type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | 0.25% |
| Dispase | Invitrogen | 17105-041 | 1.7 U/ml |
| Wire mesh screens | TWP | 060X060S0065W36T | No. 60 mesh, stainless |
| Hanks’ balanced salt solution | Invitrogen | 24020-117 | |
| CytoPrep fixative | Fisher Scientific | 12-570-10 | Preserves smear slides |
| Papanicolaou stain EA-65 | EMD Chemicals | 7054X-85 | |
| Papanicolaou stain OG-6 | EMD Chemicals | 7052X-85 | |
| Harris’ Alum hematoxylin | EMD Chemicals | 638A-85 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare | NDC 10019-773-60 | Used with isoflurane vaporizer or in a drop system closed anesthetic chamber |
References
- Abraham, M. C. Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection. Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).
- Black, C. A. Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis. Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).
- Black, C. A. Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection. Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).
- Black, C. A. Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes. J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).
- Buchannan, D. L. Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification. Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).
- Clemons, K. V. Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity. Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).
- Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection. J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).
- Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses. Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).
- Enjalbert, B. A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections. 77 (11), 4847-4847 (2009).
- Feinen, B. Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection. Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).
- Fidel, P. L. Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis. Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).
- Fidel, P. L. An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis. Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis. Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).
- Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).
- Fidel, P. L. A murine model of Candida glabrata vaginitis. J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).
- Fidel, P. L. Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).
- Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D. Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).
- Fidel, P. L., Sobel, J. D., Zak, O., Sande, M. . Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy. , 741-748 (1999).
- Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans. Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).
- Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance. Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).
- Gill, N. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).
- Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice. Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).
- Hamad, M. Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection. Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).
- LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis. Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).
- McGrory, T., Garber, G. E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection. Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).
- Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).
- Nomanbhoy, F. Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity. Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).
- Pietrella, D. A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique. Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).
- Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora. Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).
- Saavedra, M. Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis. Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis. Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).
- Sobel, J. D. Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis. Clin. Infect. Dis. 14, S148-S153 (1992).
- Sobel, J. D. Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations. Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).
- Song, W. Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice. Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).
- Taylor, B. N. In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus. J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).
- Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis. Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).
- Tirabassi, R. S. A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2. Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).
- Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).
- Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis. J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).
- Yano, J. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).
